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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BH0016 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
產品貨號：BH0016
產品規(guī)格：1×10^6
本產品僅供科學研究或進一步生產使用,，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
A375 EGFP人惡性黑色素瘤細胞（STR鑒定）
細胞介紹
A375源自一位54歲女性,，是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株,。該細胞可在免疫抑制小鼠上成瘤,，在瓊脂上形成克隆。
A375-EGFP是在 A375細胞上用慢病毒標記上EGFP,，可以顯示綠色熒光,，帶有嘌呤霉素抗性。
細胞特性
1） 來源：人黑色素瘤
2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長
3） 含量：>1x106細胞數
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用,。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 1）準備 DMEM基礎培養(yǎng)基 87 %，
優(yōu)質胎牛血清 10 %
GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
P/S青霉素-鏈霉素 1%
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現用現配,。
二． 細胞處理：
1） 凍存細胞的復蘇：：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行,。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數板計數,，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱、代數,、日期等信息,。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害,。
A375 EGFP人惡性黑色素瘤細胞（STR鑒定）
