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上海語(yǔ)純生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員·1年EC96306EHA101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- EC96306 產(chǎn)品型號(hào)
- 語(yǔ)純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：48更新時(shí)間：2025-04-23 16:22:13
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- 語(yǔ)純生物
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | EC96306 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號(hào)：EC96306
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
EHA101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
EHA101
菌株為C58型背景,，核基因中含有篩選標(biāo)簽
——利福平抗性基因Rif,，為了便于轉(zhuǎn)化操作,，
此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型
Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基
因 (vir 基因是
T-DNA 插入植物基因組必需的元件,，
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T
DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體
T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA)
型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：
Kan,，賦予 EHA101 菌株卡那霉素抗性,，適用于玉米、水稻,、煙草
等植物的轉(zhuǎn)基因操作,。
本公司
開(kāi)發(fā)的 EHA101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng) pK7WGF2
質(zhì)粒
(壯觀霉素抗性，
size:11876 bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105cfu/μg DNA,。
產(chǎn)品組成
組分
EHA101
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58
(RifR ) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR ) Nopaline
存儲(chǔ)條件
-80 ℃
保存,；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外,，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留,；
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率
≥105cfu/μg
DNA。
使用方法
1. 將新的
2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷,；或者將儲(chǔ)存于
75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,，在超凈工
作臺(tái)中將其倒
置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā),，
然后插入冰中預(yù)冷,；
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入
0.01-1 μg質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5 μl）,，用 200
μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋,；
3. 開(kāi)啟電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω,，25 μF）,，將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插
入冰中,，加入 900 μl 無(wú)抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無(wú)菌空管中,，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)。
（注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦,，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,，留取 100 μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平
板上,，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時(shí),，28℃培養(yǎng) 48 小時(shí)
即可；平板中同時(shí)加入雙元載體抗生素,，20μg/ml Rif 時(shí),，需 28℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50
μg/ml rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 小時(shí)）,。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用,；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg /μl,，利福平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略）,，所以相關(guān)抗性基因可以不用添加,。
EHA101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
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