Rosetta-gami 2 (DE3)pLacl 感受態(tài)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優(yōu)點(diǎn),;Rosetta-gami 2
(DE3)系列菌株是來(lái)源于 Origami 2 系列菌株,在其染色體上帶有溶源性的 λDE3,可表達(dá) T7 RNA
聚合酶,。由于該菌株不含卡納抗性,,適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動(dòng)子系列載體,。該菌株攜帶
有 trxB 和 gor 基因突變,,從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達(dá)效率;同時(shí)帶有的 pLacIRARE2
質(zhì)粒(攜帶氯霉素抗性),,除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA,
CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密碼子的 tRNA 外,,還提供了第七個(gè)稀有密碼子 CGG 的 tRNA,因而能夠增
強(qiáng)真核細(xì)胞蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)水平,。此外,LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 啟動(dòng)子在無(wú)誘導(dǎo)劑時(shí)
的本底表達(dá),。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè),,Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107
cfu/μg DNA,。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10
trxB pLacIRARE2 (CamR, StrR, TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存,;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質(zhì)量控制
除 pLacIRARE2 外,,無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化,;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,,輕輕彈勻,,冰上孵育 30min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),,熱激 90s 后,,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min,;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),,后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜,。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保高轉(zhuǎn)化效率,,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔,。
Rosetta-gami 2 (DE3)pLacl 感受態(tài)
