T7 Express lysY/Iq感受態(tài)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
T7 Express LysY/Iq 菌株適合于高效轉(zhuǎn)化和蛋白表達(dá)的化學(xué)活性大腸桿菌細(xì)胞,。laclq 對(duì)表達(dá)的嚴(yán)格
控制允許克隆潛在毒性基因,,溶菌酶控制 T7 RNA 聚合酶可以表達(dá)毒性基因,LysY 是 T7 溶菌酶的
一個(gè)變體,,缺乏任何酰胺酶活性,,因此細(xì)胞在誘導(dǎo)過(guò)程中對(duì)裂解不太敏感。溶菌酶/lacIq 質(zhì)粒的維
持不需要抗生素選擇,,缺乏蛋白酶 Lon 和 OmpT,。抗噬菌體 T1(fhuA2),。不限制甲基化
DNA(McrA-,、McrBC-、EcoBr-m-,、Mrr-),。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè),T7 Express LysY/Iq 感受態(tài)細(xì)
胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA,。
產(chǎn)品組成
組分
T7 Express LysY/Iq
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:MiniF lysY lacIq (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::mini Tn10--TetS )2 [dcm] R(zgb-
210::Tn10--TetS) endA1 Δ(mcrC-mrr) 114::IS10
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存,;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pRARE 外,,無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留,;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,,置于冰浴中融化,;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,,冰上孵育 30 min,;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),,熱激 90s 后,,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),,后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min,;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜,。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可,;
4. 為確保高轉(zhuǎn)化效率,,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,,并且要盡量輕柔。
T7 Express lysY/Iq感受態(tài)
