日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

LLC+luc 小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 ,LLC/luc

 Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系，該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型,，可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因,。

細(xì)胞特性

來(lái)源：小鼠肺癌組織

形態(tài)：半貼壁生長(zhǎng),，混合形態(tài)，有上皮細(xì)胞樣,，松散貼壁或懸浮有梭形,、圓形等細(xì)胞形態(tài) 。

含量：含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱,。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,，凍存留種后再進(jìn)行篩選,。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過(guò)程中,，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選,。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng),。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,，若細(xì)胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%

注意：此細(xì)胞貼壁不牢，生長(zhǎng)前期懸浮細(xì)胞較多,，后期貼壁細(xì)胞較多,，建議傳代和換液時(shí)回收培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中,。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化,。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞,、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過(guò)夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*,，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況,。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù),。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

LLC+luc 小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 ,LLC/luc