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LLC+GFP 小鼠肺癌細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記

細(xì)胞描述

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系,，該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型,，可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制,。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：小鼠肺癌組織

2）形態(tài)：半貼壁生長(zhǎng),，混合形態(tài),，有上皮細(xì)胞樣，松散貼壁或懸浮有梭形,、圓形等細(xì)胞形態(tài) ,。

3）含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,，其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱,。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選,。建議收到細(xì)胞后至少傳3代,，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng),，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,，漂浮細(xì)胞大于60%,，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細(xì)胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,，可停止篩選,，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2）請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,，若細(xì)胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；雙抗,，1%

注意：此細(xì)胞貼壁不牢,，生長(zhǎng)前期懸浮細(xì)胞較多，后期貼壁細(xì)胞較多,，建議傳代和換液時(shí)回收培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

 LLC+GFP 小鼠肺癌細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記