2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。注意事項
1.培養(yǎng)密度不要超過80%,，密度過高時細胞可能自發(fā)分化。
2.包被試劑對這個細胞影響不是特別大,。如果用包被試劑會更好,，不用的話，貼壁弱一些,，但不會影響細胞的狀態(tài),，包被試劑包被培養(yǎng)皿讓細胞更好貼壁，推薦使用：Applied Cell Extracellular Matrix (G422)
3.若使用包被試劑,，這個細胞消化時間比較長,，放在培養(yǎng)箱里消化是 4-6min左右（細胞消化時間與所用胰酶效價、消化時候細胞密度,、細胞貼壁強弱以及溫度等因素有關,，建議第一次消化時候，多在顯微鏡下觀察,，以找到優(yōu)良消化時間）,。
HepaRG 人肝癌細胞貼壁細胞參考：
一. 收貨后消毒靜置待細胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻,，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落90%以上終止消化,，一般小于1分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落,。如果是貼壁牢固的細胞則置于37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率,，每40-50秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細胞脫落,，如果脫落90%以上則對應3-6ml含有10%血清的培養(yǎng)基終止結束，以防胰酶殘留,。如果貼壁非常牢固的細胞,，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化結束,，再加入1ml培養(yǎng)基讓細胞緩沖后再過2分鐘進行二次消化,，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激,，保護細胞膜,。或采用刮產刮細胞的方式處理也可以,?？倸w原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。
三.消化完成后輕輕吹勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。
運輸形式常溫發(fā)貨：收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-6小時后觀察密度和狀態(tài)并拍照2-3張反饋給銷售,，密度達標就可以傳代,。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管,，另外一瓶繼續(xù)傳代,，反復凍存足量種子后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種,。
干冰發(fā)貨：常規(guī)細胞發(fā)貨凍存管2只,，復蘇1只，另外一只備用,，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個,，均沒有復蘇成功的情況及時留存復蘇照片通知銷售處理售后問題。
生物安全1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害,。
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