病毒保存液里有什么？

時(shí)間：2024/12/6閱讀：747

病毒是一種個(gè)體微小結(jié)構(gòu)簡單,，只含一種核酸（DNA或RNA）,，必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型生物。

病毒是一種非細(xì)胞生命形態(tài),，它由一個(gè)核酸長鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成,，病毒沒有自己的代謝機(jī)構(gòu)，沒有酶系統(tǒng),。因此病毒離開了宿主細(xì)胞,，就成了沒有任何生命活動(dòng)、也不能獨(dú)立自我繁殖的化學(xué)物質(zhì),。

常見的病毒樣本保存液的設(shè)計(jì)或針對(duì)于核酸的保護(hù),，或指向病毒功能蛋白的保護(hù)。

針對(duì)核酸的樣本保存液中,，通常含有DNase/RNase和其他功能酶的抑制作用，破壞功能蛋白,，這一類病毒樣本保存緩沖液更適用于pcr方法或其他分子檢測(cè)方法的使用,。

圖片來源：病毒保存液滅活和非滅活有哪些區(qū)別,？

而主要保護(hù)功能蛋白的病毒樣本保存液，對(duì)于核酸的保護(hù)效果不佳,，更適用于病毒抗原或抗體的檢測(cè),，比如elisa或膠體金、熒光等快速檢測(cè)的使用,。

1,、滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液

病毒保存液主要分滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液。

1）非滅活型病毒保存液

非滅活型的病毒保存溶液不含裂解鹽,，可以保持病毒的體外活性以及抗原和核酸的完整性,，保持不分解病毒蛋白包膜，并保持病毒樣品的原始性程度,。除核酸提取和檢測(cè)外,，它還可用于病毒培養(yǎng)和分離。

非滅活病毒保存液的成分主要以Hank's液為基礎(chǔ),，在Hank's液基礎(chǔ)上,，添加了很多抑菌成分、冷凍保護(hù)劑等成分,。

圖片來源：Hanks氏病毒保存液（pH7.4-7.6）-產(chǎn)品詳情-青島海博生物

Hank's平衡鹽溶液（Hank's Balanced Salt Solution, HBSS）是細(xì)胞分離或培養(yǎng)中常用的磷酸鹽緩沖液之一,，主要成分包括NaCl、KCl,、KH₂PO₄,、Na₂HPO₄、NaHCO₃,、CaCl₂,、MgCl₂、MgSO₄和葡萄糖,。Hank's平衡鹽溶液常用于組織塊的漂洗,、細(xì)胞的洗滌、細(xì)胞或組織的運(yùn)輸,、其他試劑的配制以及作為細(xì)胞計(jì)數(shù)的稀釋液等,。

圖片來源：細(xì)胞培養(yǎng)基大全-畢特博生物

平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution, BSS）也叫生理溶液（Physiological Solution），是集緩沖液的緩沖力,、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體的,，具有維持滲透壓、保持PH穩(wěn)定以及提供簡單的營養(yǎng)的作用,，可滿足體外實(shí)驗(yàn)中組織,、器官或細(xì)胞的生存和代謝的基本需要。一些平衡鹽溶液中還添加了少量酚紅,，用以指示溶液的酸堿度變化,。

2）滅活型病毒保存液

滅活型病毒保存液添加有裂解鹽,，可以降解樣本病毒，使其失去活性,，可以有效地防止操作員繼發(fā)感染,。

保存液里面含有的Tris、裂解鹽,、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸,，從而通過后續(xù)的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)，以此判斷樣本是否含病毒特征核酸,，即是否感染病毒,。

圖片來源：實(shí)時(shí)熒光定量pcr(real-time pcr)

它還包含抑制劑可以防止病毒核酸降解，以便進(jìn)行后續(xù)檢測(cè),，并且可以在室溫下保存相對(duì)較長的時(shí)間,，從而節(jié)省了病毒樣品的保存和運(yùn)輸成本。

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滅活型病毒保存液則使用上更安全,，操作環(huán)境要求也不用那么嚴(yán)格,。

3、非滅活型病毒保存液的成分及作用

目前研究的病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎(chǔ),、慶大霉素,、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五組分）,、生物緩沖劑HEPES,、氨基酸、冷凍保護(hù)劑,、甘油等多種組分

1）純化水

純化水,，H?O。純化水在病毒保存液中的主要作用是作為溶劑,，提供一個(gè)適宜的介質(zhì)用于稀釋和混合其他成分,，同時(shí)也有助于維持保存液的pH值在一個(gè)理想的范圍內(nèi)，這有助于維持病毒的穩(wěn)定性,。

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2）葡萄糖

葡萄糖，分子式C?H??O?,。葡萄糖在病毒保存液中的添加主要是為了提供一個(gè)穩(wěn)定的能量來源,，幫助維持樣本中可能存在的細(xì)胞的生存狀態(tài)，從而間接保護(hù)病毒的活性,。

圖片來源：「合壹商埠專家」甘油葡糖苷（三）——合成與純化,！

葡萄糖也可以幫助調(diào)節(jié)保存液的滲透壓，維持一個(gè)適宜的環(huán)境，防止細(xì)胞因環(huán)境壓力變化而發(fā)生破裂或收縮,。

3）甘油

甘油,，分子式C?H?O?,。甘油在病毒保存液中的添加主要是為了提供冷凍保護(hù),，防止樣本在低溫保存和運(yùn)輸過程中病毒受損，具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用,，可以防止病毒蛋白在低溫或者是不穩(wěn)定環(huán)境中變性或聚集,，從而保持病毒的感染能力。

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4）氯化鈉

氯化鈉,，NaCl。氯化鈉在病毒保存液中的添加主要是為了調(diào)節(jié)溶液的滲透壓和離子強(qiáng)度,，從而提供一個(gè)適宜的環(huán)境以維持病毒的穩(wěn)定性和活性,。

圖片來源：氯化鈉結(jié)構(gòu)

5）蔗糖

蔗糖，分子式C??H??O?? ,。蔗糖在病毒保存液中的添加通常是為了提供冷凍保護(hù)和穩(wěn)定病毒顆粒,，從而保持病毒的結(jié)構(gòu)和感染活性。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

6）檸檬酸鈉

檸檬酸鈉,，分子式是C?H?Na?O?,。檸檬酸鈉在病毒保存液中的添加主要是因?yàn)樗木彌_能力和對(duì)金屬離子的螯合作用。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

7）十二烷基肌氨酸鈉

十二烷基肌氨酸鈉,，分子式C??H??NNaO?,。十二烷基肌氨酸鈉在病毒保存液中主要用于增強(qiáng)病毒核酸的提取效率，減少病毒的感染性,，以及提高樣品的處理性能,，它是病毒學(xué)研究和診斷中常用的添加劑之一。

8）酚紅

酚紅能夠通過顏色的變化來指示溶液的pH變化,。在酸性條件下,，酚紅呈現(xiàn)黃色；在中性和堿性條件下,，它呈現(xiàn)紅色到粉紅色,。這種顏色變化可以幫助研究人員監(jiān)控保存液的pH狀態(tài)，確保其處于適宜病毒保存的范圍內(nèi),。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

雖然酚紅的主要功能是作為pH指示劑,，但它本身并不調(diào)節(jié)pH值，而是用來監(jiān)測(cè)和指示pH狀態(tài),。酚紅對(duì)細(xì)胞有一定毒性,，在一些特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)置中，如果存在對(duì)酚紅敏感的應(yīng)用（例如某些細(xì)胞培養(yǎng)或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)），可能需要考慮使用不含酚紅的保存液或培養(yǎng)基,。

9）慶大霉素,、真菌抗生素

多種抗生素聯(lián)合，具有抗細(xì)菌和抗真菌的作用,。

圖片來源：慶大霉素-醫(yī)學(xué)百科-百科知識(shí)

10）牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基,，分子量為66.430kDa,，等電點(diǎn)為4.7。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,，可在病毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護(hù)膜,，使其不易分解，保證病毒的完整性,，提高分離率,；還可在western blot中作為Blocking agent；在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA,，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附,，能減輕有些酶的變性,，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性,。

11）氨基酸

為病毒存活提供必需的營養(yǎng)物質(zhì),。