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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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二手賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀介紹與應(yīng)用解析
一、設(shè)備概述
熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）技術(shù),，作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)重要工具,，廣泛應(yīng)用于基因定量、病原體檢測,、基因表達(dá)分析,、轉(zhuǎn)基因檢測以及微生物監(jiān)測等多個(gè)領(lǐng)域。賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）推出的 Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System（以下簡稱 7500 系統(tǒng)）是一款經(jīng)典的熒光定量 PCR 平臺,，憑借其模塊設(shè)計(jì)和兼容性,，在多個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作流程中持續(xù)發(fā)揮作用。
作為一款被廣泛應(yīng)用并已有多年市場歷史的儀器型號,，7500 系統(tǒng)的二手市場活躍,，越來越多的實(shí)驗(yàn)室基于預(yù)算、維護(hù)可持續(xù)性和培訓(xùn)目的考慮,，在配置PCR平臺時(shí)選擇質(zhì)量良好,、功能齊全的二手設(shè)備。
二,、設(shè)備結(jié)構(gòu)與核心組成
賽默飛 7500 系統(tǒng)采用封閉式臺式主機(jī)結(jié)構(gòu),，由以下幾個(gè)主要部分組成：
1. 光學(xué)系統(tǒng)
內(nèi)置 5 色光學(xué)檢測系統(tǒng)，支持多重?zé)晒馔ǖ罊z測,，包括 FAM,、VIC、ROX,、TAMRA,、SYBR Green 等常用染料,。
激發(fā)光源：高亮度 LED
檢測器：CCD 相機(jī)
濾光片組合：固定濾光系統(tǒng)，自動完成多通道讀取
優(yōu)點(diǎn)：減少光路移動部件,，增強(qiáng)設(shè)備整體穩(wěn)定性和耐用性
2. 熱循環(huán)模塊
采用 Peltier 熱電元件,，支持標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板（0.2 mL 反應(yīng)體系）
升溫速度：約 1.6℃/s
溫控精度：±0.25℃
溫度均一性：±0.5℃（典型）
熱蓋溫度：可調(diào)（默認(rèn) 105℃）,，用于防止反應(yīng)液揮發(fā)
3. 軟件系統(tǒng)
配套使用 SDS 軟件（v1.4 及以上）,，具備以下功能：
實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線繪制
Ct 值自動計(jì)算
相對定量/絕對定量分析
融解曲線分析（SYBR Green 應(yīng)用）
多重反應(yīng)設(shè)置與自動數(shù)據(jù)分組
4. 通信接口
USB 接口用于數(shù)據(jù)導(dǎo)出
可通過串口/局域網(wǎng)連接上位機(jī)，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程操作或集群管理（部分版本支持）
三,、二手設(shè)備市場背景與應(yīng)用場景
在市場使用年限較長的 PCR 系統(tǒng)中,，7500 系列因其功能實(shí)用、性能穩(wěn)定而在二手設(shè)備中具有一定保有率,。其適用于以下場景：
中小型科研實(shí)驗(yàn)室：預(yù)算受限但需要搭建完整分子實(shí)驗(yàn)平臺
醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科室：病原體檢測與基因分型項(xiàng)目需要可快速部署的儀器
教學(xué)平臺：高校生命科學(xué)課程實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)需求
企業(yè)質(zhì)檢與研發(fā)：食品安全,、農(nóng)殘檢測、種子檢驗(yàn)等環(huán)節(jié)的分子檢驗(yàn)
四,、技術(shù)參數(shù)與功能概覽
| 參數(shù)類別 | 詳細(xì)信息 |
|---|---|
| 支持孔板 | 96 孔標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)板 |
| 檢測通道 | 5 通道：FAM,、VIC/HEX、NED/TAMRA,、ROX,、SYBR |
| 檢測靈敏度 | 可檢測 < 10 個(gè)拷貝數(shù)的模板 |
| 熱循環(huán)范圍 | 4–100℃，支持各種標(biāo)準(zhǔn) PCR 實(shí)驗(yàn) |
| 軟件支持 | 相對定量,、絕對定量,、熔解曲線、SNP 分型等 |
| 光源壽命 | LED 光源,，使用壽命長,、光衰慢 |
| 數(shù)據(jù)導(dǎo)出格式 | .sds, .xls, .csv, .txt 等多種格式 |
| 支持染料 | 通用：SYBR Green、TaqMan 探針,、MGB 探針,、多重染料體系 |
五、設(shè)備使用流程與操作簡要
1. 樣本準(zhǔn)備與反應(yīng)體系設(shè)定
樣本體系通常為 10–25 µL,，包括引物,、探針、模板 DNA,、Master Mix
加樣至96孔板后,，封板膜密封，避免蒸發(fā)
插入熱蓋前確保無氣泡,、板底干凈整潔
2. 程序設(shè)置
打開軟件,，設(shè)置熱循環(huán)參數(shù)、熒光檢測通道,、讀取模式（連續(xù)/分段）
設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與標(biāo)準(zhǔn)曲線/參考樣本位置
3. 數(shù)據(jù)采集
實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)時(shí)采集熒光信號
系統(tǒng)自動生成擴(kuò)增曲線,、標(biāo)準(zhǔn)曲線,、Ct 值等結(jié)果
4. 數(shù)據(jù)分析
采用 SDS 軟件進(jìn)行背景扣除、基線校正,、ΔΔCt 法分析等
可視化導(dǎo)出結(jié)果,，用于報(bào)告生成與歸檔管理
六、二手設(shè)備的優(yōu)勢與注意事項(xiàng)
優(yōu)勢
成本降低：較新機(jī)購買價(jià)格下降明顯,，適合預(yù)算有限實(shí)驗(yàn)室
兼容性強(qiáng)：可使用現(xiàn)有 ABI 探針試劑體系,，無需額外改造
維修配件豐富：配件供應(yīng)渠道多，維修維護(hù)便捷
適配舊軟件：對于依賴舊數(shù)據(jù)體系（如 SDS 1.4）的實(shí)驗(yàn)室,，有一定操作連續(xù)性
注意事項(xiàng)
設(shè)備來源確認(rèn)：優(yōu)選來自正規(guī)實(shí)驗(yàn)室或具有完整溯源記錄的設(shè)備
運(yùn)行時(shí)長審查：檢查累計(jì)運(yùn)行時(shí)間,、熱蓋壽命、光學(xué)系統(tǒng)狀態(tài)
校準(zhǔn)記錄：查看最近一次溫控,、光學(xué)系統(tǒng)的校準(zhǔn)與驗(yàn)證文檔
軟件兼容性：確認(rèn)設(shè)備是否能連接當(dāng)前操作系統(tǒng)版本的計(jì)算機(jī)
保修與售后：建議與具有技術(shù)支持能力的供應(yīng)商合作,，明確責(zé)任界限
七、設(shè)備升級與兼容性擴(kuò)展
盡管 7500 并非最新型號,，但其仍可在一定范圍內(nèi)通過軟件升級,、附件配置擴(kuò)展功能。例如：
更換主控電腦：連接 Windows 10 系統(tǒng)的工作站并安裝兼容驅(qū)動
軟件升級：部分版本可升級至 SDS v1.5.1,，提高兼容性與數(shù)據(jù)處理能力
溫控模塊調(diào)校：通過熱循環(huán)模塊溫度校正工具提升熱均一性
此外,，對于有特殊需求的實(shí)驗(yàn)室（如要求自動化加樣平臺對接），7500 也可與一些第三方機(jī)械臂配合使用,，但需額外配置適配接口,。
八、常見問題與維護(hù)建議
| 問題類別 | 可能原因 | 處理建議 |
|---|---|---|
| 光學(xué)通道信號異常 | 燈源老化,、濾光片污染 | 更換光源或清潔濾光片 |
| 熱蓋溫度過高報(bào)警 | 熱蓋溫控異常 | 校準(zhǔn)或更換熱蓋傳感器 |
| 通信中斷 | USB 驅(qū)動沖突,、接口松動 | 重裝驅(qū)動或更換數(shù)據(jù)線 |
| 軟件啟動失敗 | 兼容性或程序缺失 | 檢查系統(tǒng)補(bǔ)丁、更新軟件包 |
| 熒光漂移 | 板膜密封不嚴(yán),、樣本蒸發(fā) | 改進(jìn)操作步驟或使用高質(zhì)量封板膜 |
日常維護(hù)建議：
每次實(shí)驗(yàn)后及時(shí)清理熱蓋,、樣本殘留
每月檢查一次光學(xué)系統(tǒng)與濾光片通透性
每季度進(jìn)行一次熱循環(huán)均一性測試
每半年進(jìn)行溫控校準(zhǔn)與光源強(qiáng)度評估
九、典型應(yīng)用案例
新冠病毒核酸篩查（RT-qPCR）
2020年以后,，許多實(shí)驗(yàn)室使用7500系統(tǒng)搭建核酸篩查平臺,，用于E基因、N基因的實(shí)時(shí)檢測,，檢測靈敏度可達(dá)10拷貝/反應(yīng),。教學(xué)科研中的定量PCR教學(xué)實(shí)驗(yàn)
高校分子生物學(xué)與基因工程課程常用該系統(tǒng)進(jìn)行SYBR Green基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，如β-actin,、GAPDH等內(nèi)參基因表達(dá)定量分析,。臨床樣本基因表達(dá)分析
醫(yī)院檢驗(yàn)科開展腫瘤標(biāo)志物相關(guān)基因表達(dá)研究，利用7500平臺做qPCR前瞻性研究，形成術(shù)后評估模型,。
十,、結(jié)語
總的來看，Applied Biosystems 7500 熒光定量 PCR 儀雖然已非市場上最新型號,，但在功能,、兼容性、耐用性以及用戶群體上依然保持穩(wěn)定表現(xiàn),。對于需要搭建經(jīng)濟(jì)型分子檢測平臺的實(shí)驗(yàn)室而言,，采購經(jīng)過檢測、保養(yǎng)完善的二手 7500 儀器,，不失為一種合理的選擇,。
在選購過程中,，用戶應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注設(shè)備來源,、使用年限、運(yùn)行記錄,、光學(xué)與溫控系統(tǒng)的當(dāng)前狀態(tài),，以及配套軟件與售后支持等因素，確保設(shè)備投入使用后能持續(xù)提供穩(wěn)定,、可靠的數(shù)據(jù)支持,。在規(guī)范管理與定期維護(hù)的前提下，二手賽默飛7500系統(tǒng)依然能夠在多個(gè)應(yīng)用場景中完成多樣化的分子生物學(xué)任務(wù),。
