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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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二手賽默飛熒光定量PCR儀QuantStudio 3（Q3）使用價(jià)值與技術(shù)解析
一,、引言
熒光定量PCR（qPCR）是一種廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析,、病原體檢測(cè)、SNP 分型,、拷貝數(shù)變異（CNV）研究等領(lǐng)域的分子生物學(xué)技術(shù),。美國(guó)賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）旗下的Applied Biosystems（ABI）系列是其中一個(gè)被廣泛使用的qPCR平臺(tái)品牌，其推出的QuantStudio系列因其系統(tǒng)穩(wěn)定性,、操作便捷和擴(kuò)展能力等特點(diǎn),，在眾多科研及檢測(cè)機(jī)構(gòu)中得到較多應(yīng)用。
QuantStudio 3（簡(jiǎn)稱(chēng)Q3）是該系列入門(mén)型號(hào)之一,。相較于高通量版本如QuantStudio 5/6/7 Pro,，Q3定位于常規(guī)科研、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室及中等通量需求場(chǎng)所,。本文將以二手Q3設(shè)備為研究對(duì)象,，從儀器構(gòu)成、運(yùn)行機(jī)制,、技術(shù)性能,、操作流程、應(yīng)用范圍,、數(shù)據(jù)輸出,、維護(hù)要點(diǎn)、二手市場(chǎng)價(jià)值,、適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景及采購(gòu)建議等多個(gè)方面進(jìn)行全面介紹,，旨在幫助用戶(hù)科學(xué)判斷其在當(dāng)前實(shí)驗(yàn)需求中的適配度。
二,、儀器構(gòu)成與基本參數(shù)
1. 主機(jī)結(jié)構(gòu)
QuantStudio 3 qPCR系統(tǒng)整合熱循環(huán)模塊與熒光檢測(cè)光路為一體,，采用封閉式光學(xué)系統(tǒng)。其結(jié)構(gòu)緊湊,，便于放置于標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或生物安全柜中,。外殼材質(zhì)為ABS復(fù)合材料，兼具機(jī)械強(qiáng)度與輕便性,。主機(jī)頂部為樣品倉(cāng),，配有自動(dòng)加熱蓋；正面嵌入彩色觸控屏用于運(yùn)行設(shè)置和狀態(tài)查看。
2. 熱循環(huán)模塊
樣品通量：標(biāo)準(zhǔn)96孔（0.2 mL管或96孔板）
升溫速率：約3.0 °C/s
降溫速率：約3.0 °C/s
溫度均一性：±0.25 °C（30 秒內(nèi)）
溫控精度：±0.15 °C
加熱蓋溫度：默認(rèn)設(shè)置為105 °C,，可調(diào)范圍90–110 °C
3. 光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)
QuantStudio 3 配備6通道光學(xué)檢測(cè)模塊,，支持多重?zé)晒馔ǖ啦杉?/p>
| 通道 | 激發(fā)波長(zhǎng)（nm） | 發(fā)射波長(zhǎng)（nm） | 適用染料（常用） |
|---|---|---|---|
| Channel 1 | ~470 | ~514 | SYBR Green / FAM |
| Channel 2 | ~520 | ~558 | VIC / HEX |
| Channel 3 | ~550 | ~580 | NED / TAMRA |
| Channel 4 | ~620 | ~645 | ROX / Texas Red |
| Channel 5 | ~650 | ~682 | Cy5 |
| Channel 6 | ~700 | ~720 | Optional dyes |
ROX通道可用于熒光校正（Passive Reference）。該系統(tǒng)不需用戶(hù)更換濾光片,，所有通道在同一次反應(yīng)中可自動(dòng)切換采集。
三,、系統(tǒng)軟件與數(shù)據(jù)分析能力
1. 軟件平臺(tái)
QuantStudio 3 配套使用Design & Analysis Software（DA軟件）,，支持Windows平臺(tái)。用戶(hù)可通過(guò)觸屏或遠(yuǎn)程PC登錄方式進(jìn)行程序設(shè)置與結(jié)果分析,。軟件界面圖形化程度較高,，便于初學(xué)者快速掌握。
主要功能包括：
實(shí)時(shí)熒光曲線(xiàn)顯示
Ct值自動(dòng)計(jì)算
基線(xiàn)和閾值自動(dòng)調(diào)整
熔解曲線(xiàn)分析
相對(duì)表達(dá)分析（ΔΔCt）
絕對(duì)定量分析（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法）
拷貝數(shù)變異分析
熒光信號(hào)平滑與背景扣除功能
2. 數(shù)據(jù)導(dǎo)出格式
支持導(dǎo)出結(jié)果至CSV,、TXT,、PDF、Excel等格式,，方便在第三方軟件（如GraphPad Prism,、SPSS等）中進(jìn)行后續(xù)統(tǒng)計(jì)分析。也可將原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)包（.eds格式）導(dǎo)入更高級(jí)的分析平臺(tái)（如Thermo Cloud）進(jìn)行遠(yuǎn)程存儲(chǔ)和多用戶(hù)協(xié)作,。
四,、典型應(yīng)用場(chǎng)景
QuantStudio 3 適合下列實(shí)驗(yàn)類(lèi)型：
基因表達(dá)定量：相對(duì)定量（如炎癥因子IL-6、TNF-α表達(dá)比較）,、絕對(duì)定量（如病毒載量評(píng)估）,。
突變檢測(cè)與SNP分型：配合探針?lè)ㄗR(shí)別堿基替換，適合小規(guī)模遺傳篩查,。
微生物與病毒檢測(cè)：在食品安全,、臨床分子診斷（如HBV、SARS-CoV-2 qPCR篩查）中可用于常規(guī)陽(yáng)性/陰性判斷,。
拷貝數(shù)變異（CNV）分析：需配合標(biāo)準(zhǔn)化引物探針庫(kù),。
教學(xué)與培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)：適合高校生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等專(zhuān)業(yè)教學(xué)平臺(tái)入門(mén)使用,。
五,、操作流程簡(jiǎn)要
典型qPCR實(shí)驗(yàn)操作流程如下：
模板與反應(yīng)體系準(zhǔn)備：DNA/cDNA樣本、引物,、熒光染料或探針,，配置總反應(yīng)體系體積（20 µL或25 µL）。
裝板并封板：使用0.2 mL反應(yīng)管或96孔PCR板,，封板膜密封,，避免蒸發(fā)。
插入儀器并設(shè)定程序：
酶激活（95 °C，2–10 min）
擴(kuò)增循環(huán)（95 °C 15 s,，60 °C 60 s ×40 cycles）
選擇染料,、設(shè)置檢測(cè)通道；
開(kāi)始運(yùn)行與實(shí)時(shí)監(jiān)控,；
結(jié)果導(dǎo)出與分析：Ct值計(jì)算,、圖像保存、熔解曲線(xiàn)判斷,。
六,、維護(hù)與日常檢查
雖為二手設(shè)備，QuantStudio 3若保養(yǎng)得當(dāng),，其運(yùn)行壽命依然可持續(xù)5–8年,。
