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二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀系統(tǒng)技術(shù)概述
一,、引言
隨著分子診斷和基因研究需求的不斷增長，實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）技術(shù)在科研,、臨床檢測,、食品安全、生物制藥等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,。PCR儀器作為該技術(shù)的核心設(shè)備,，具有重要作用。在設(shè)備選型中,，部分實驗室選擇使用二手儀器作為過渡或擴(kuò)容方案,，以控制成本并維持實驗效率,。
羅氏（Roche）推出的 LightCycler® 96 是一款廣泛應(yīng)用于科研和基礎(chǔ)檢測領(lǐng)域的中通量實時熒光定量PCR儀,。其二手設(shè)備在功能結(jié)構(gòu)、操作流程等方面基本保持完整,，并在技術(shù)指標(biāo)滿足要求的前提下,，仍可繼續(xù)在標(biāo)準(zhǔn)實驗環(huán)境中發(fā)揮作用。本文將從儀器構(gòu)造,、功能特點,、使用優(yōu)勢、適用范圍,、選購建議等方面,，全面介紹二手 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR系統(tǒng)。
二,、設(shè)備概況
LightCycler® 96 是羅氏分子系統(tǒng)產(chǎn)品線中的一款96孔qPCR平臺,，設(shè)計理念偏向通用性和穩(wěn)定性，適用于中小規(guī)模實驗室的日?；蚨咳蝿?wù),。該設(shè)備集成了精準(zhǔn)溫控系統(tǒng)、四通道熒光檢測模塊以及數(shù)據(jù)分析平臺,，可支持常見的SYBR Green,、TaqMan探針等反應(yīng)體系。
主要技術(shù)參數(shù)如下：
| 項目 | 參數(shù) |
|---|---|
| 孔位格式 | 標(biāo)準(zhǔn)96孔PCR板 |
| 熱循環(huán)范圍 | 4–99°C |
| 升降溫速率 | 升溫最大4.4°C/s,，降溫最大2.2°C/s |
| 溫控精度 | ±0.2°C |
| 通道數(shù)量 | 4個熒光通道（FAM, HEX/VIC, ROX, Cy5） |
| 動態(tài)范圍 | 6–8個數(shù)量級 |
| 檢測靈敏度 | 0個拷貝 |
| 檢測時間 | 一次反應(yīng)約35–60分鐘 |
三,、構(gòu)造與工作原理
1. 溫控系統(tǒng)
設(shè)備采用雙向帕爾貼（Peltier）技術(shù)，通過閉環(huán)反饋控制,，確保PCR反應(yīng)過程中的溫度均一性與重現(xiàn)性,。熱蓋系統(tǒng)自動壓緊,，防止樣品蒸發(fā)，提升反應(yīng)效率,。
2. 熒光檢測模塊
光學(xué)系統(tǒng)具備四個獨立檢測通道,，采用精密濾光片與光電探測器分光讀取熒光強度，可實時監(jiān)控多重擴(kuò)增反應(yīng)的熒光信號,，適用于雙通道或多通道實驗設(shè)計,。
3. 控制與數(shù)據(jù)分析
配套 LightCycler® 96 軟件支持：
擴(kuò)增曲線和熒光信號的實時可視化；
Ct值自動判讀,；
標(biāo)準(zhǔn)曲線法,、ΔΔCt法、相對/絕對定量分析,；
熔解曲線分析,，判斷引物特異性。
四,、二手設(shè)備使用價值分析
1. 經(jīng)濟(jì)性
二手LightCycler® 96 儀器通常原價50%甚至更多,，對于預(yù)算有限的實驗室是一種可行的擴(kuò)展選擇。若由正規(guī)渠道回收,、翻新并經(jīng)校準(zhǔn)檢測,，設(shè)備仍可提供穩(wěn)定的數(shù)據(jù)輸出。
2. 適用性
二手設(shè)備在功能模塊完整,、光學(xué)系統(tǒng)正常,、溫控系統(tǒng)穩(wěn)定的前提下，可應(yīng)用于以下任務(wù)：
RNA逆轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)定量,；
病原體DNA/RNA的檢測,；
突變篩查與多態(tài)性分析；
食品和水質(zhì)中污染物的分子檢測,；
藥物代謝基因分型研究,。
3. 軟件兼容性
配套軟件無需訂閱費用，支持在主流Windows操作系統(tǒng)下運行,，兼容xlsx,、csv、txt等格式數(shù)據(jù)導(dǎo)出,，便于進(jìn)一步統(tǒng)計分析或整合到LIMS系統(tǒng)中,。
五、二手設(shè)備選購與使用注意事項
1. 購買渠道與檢測報告
建議通過有資質(zhì)的實驗設(shè)備供應(yīng)商采購,，要求提供設(shè)備來源,、校準(zhǔn)報告、檢測報告,、功能測試記錄,，以及操作說明書等完整資料,。避免通過非正規(guī)途徑購入未經(jīng)檢測的設(shè)備，存在數(shù)據(jù)不穩(wěn)定或電氣故障等隱患,。
2. 外觀與結(jié)構(gòu)檢查
儀器應(yīng)無明顯磕碰或變形,；
內(nèi)部托盤無銹蝕或污染；
光路模塊無損壞,、無灰塵遮蔽,；
顯示屏、端口,、按鈕正常運行,。
3. 功能測試建議
建議進(jìn)行以下項目測試：
各通道熒光采集準(zhǔn)確性；
溫度梯度測試（96孔溫控均勻性）,；
實驗復(fù)現(xiàn)性測試（3次重復(fù)反應(yīng)Ct值標(biāo)準(zhǔn)差≤0.2）,；
軟件運行穩(wěn)定性。
4. 易損件更換與保養(yǎng)
常見易損件包括熱蓋密封圈,、光源模塊,、風(fēng)扇等。建議定期檢查并更換,，以延長設(shè)備使用壽命,。設(shè)備應(yīng)在通風(fēng)干燥環(huán)境中使用,，避免強光,、濕氣、高溫影響,。
六,、典型應(yīng)用實例
1. 科研實驗室
某高校生命科學(xué)實驗室購入一臺二手LightCycler® 96用于課題組日常基因表達(dá)檢測,。經(jīng)過校準(zhǔn)后,，該設(shè)備可穩(wěn)定運行，配合自制SYBR體系完成對植物轉(zhuǎn)基因株系的篩選與分析,。
2. 醫(yī)院檢驗科
在病原體篩查方面,，一些社區(qū)醫(yī)院通過采購二手qPCR設(shè)備構(gòu)建初步檢測能力，對常見呼吸道病毒,、HPV,、人類皰疹病毒等進(jìn)行初篩，隨后送樣至上級醫(yī)院進(jìn)一步確診,。
3. 食品企業(yè)質(zhì)控實驗室
某食品企業(yè)為檢測成品中是否存在非法添加物質(zhì)（如動物源成分,、轉(zhuǎn)基因成分），購置了二手LightCycler® 96 配合商業(yè)試劑盒,，開展日常抽檢和留樣復(fù)測,。
七,、常見問題與解決方案
| 問題 | 可能原因 | 處理建議 |
|---|---|---|
| 某熒光通道無信號 | 濾光片老化或光源損壞 | 檢查光學(xué)系統(tǒng)，必要時更換光源 |
| 孔間Ct值差異大 | 樣品裝載不均或溫控不穩(wěn)定 | 校準(zhǔn)溫控模塊,、檢查耗材 |
| 程序崩潰或數(shù)據(jù)丟失 | 軟件版本與操作系統(tǒng)不兼容 | 更新驅(qū)動程序或更換控制電腦 |
| 托盤運行異響 | 機(jī)械部件老化或潤滑不足 | 清潔內(nèi)部機(jī)械結(jié)構(gòu),，添加潤滑油 |
八、發(fā)展趨勢與選型建議
隨著數(shù)字PCR,、微流控PCR等新技術(shù)的發(fā)展,，傳統(tǒng)qPCR平臺逐漸融合更多自動化與微型化元素。然而,，在預(yù)算有限,、應(yīng)用任務(wù)穩(wěn)定的實驗場景中，二手LightCycler® 96 仍具備實用價值,。建議在以下情況下考慮采購：
實驗室為教學(xué)或科研用途,，對通量要求不高；
僅用于標(biāo)準(zhǔn)化重復(fù)實驗,，不涉及高通量篩查,；
可配合已有反應(yīng)體系與試劑平臺，形成閉環(huán)工作流程,。
九,、總結(jié)
二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀作為一款技術(shù)成熟、操作簡便的中通量qPCR平臺,，若維護(hù)得當(dāng),，仍可在常規(guī)分子生物學(xué)研究及基礎(chǔ)檢測中發(fā)揮良好作用。對于實驗室預(yù)算有限,、檢測需求明確的單位,，合理選購并科學(xué)使用二手設(shè)備，是提升實驗效能,、優(yōu)化資源配置的一種現(xiàn)實路徑,。
