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細(xì)胞初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng)，是從供體獲取組織后的培養(yǎng),。其zui大優(yōu)點(diǎn)是：組織和細(xì)胞剛剛離體,，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀,，在供體來源充分,、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡、性別）,，在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài),。

實(shí)驗(yàn)方法原理：      

合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法，能把組織塊分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞,，便于細(xì)胞從培養(yǎng)液中攝取營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物,，細(xì)胞能較快地長成單層。

本法尤適用于培養(yǎng)大量組織,，細(xì)胞產(chǎn)量高,；但用于經(jīng)常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣，無菌操作不良時且易污染,。

實(shí)驗(yàn)材料：試劑,、試劑盒 Hanks、培養(yǎng)液、胰蛋白酶

儀器,、耗材：吸管,、平皿、培養(yǎng)瓶,、燒杯,、攪拌器、三角燒瓶,、不銹鋼篩,、眼科剪、眼科鑷,、計(jì)數(shù)板

實(shí)驗(yàn)步驟：       

1.  準(zhǔn)備

取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,，紫外線消毒20 分鐘；

2.  布局

點(diǎn)燃酒精燈（或煤氣燈）,，安裝吸管帽（應(yīng)通過火焰）,；

3.  處理組織

把組織塊置入燒杯中，用Hanks液漂洗2~3 次,，去除血污,；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘,；

4.  剪切

用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊（用手術(shù)刀割亦可）,，以便于消化；加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液,，然后一并倒入三角燒瓶中,，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞；

5.  消化

或用恒溫水浴,，或置入37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱消化均可,，消化中每隔20 分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨茫ㄏ捌恐行柚靡粺o菌攪棒）,；消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定,；

6.  分離

在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞,，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩,，濾掉尚未充分消化開的組織塊（必要時可繼續(xù)進(jìn)行消化）,；低速（500~1000 轉(zhuǎn)/分）離心消化液5 分鐘，吸出上清,，加入適量含有血清的培養(yǎng)液（如有其它酶或EDTA 等消化,，需用Hanks液洗脫一兩次后,，再加入培養(yǎng)液）；

7.  計(jì)數(shù)

用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中,；對大多數(shù)細(xì)胞來說,，pH 要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色,，如顏色偏黃，說膽液體變酸,，可用NaHCO3調(diào)整,；

8.  培養(yǎng)

置入36.5 ℃溫箱培養(yǎng)；如用CO2溫箱培養(yǎng),，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞,，紗布塞易生霉菌，每次換液時需更換新塞,。

注意事項(xiàng)：   

1.  組織塊,、胰蛋白酶、培養(yǎng)液等易受紫外線傷害的物品,，在培養(yǎng)時再攜入操作野,；如預(yù)先置入，需用紙張覆蓋,，以免受射線影響,；開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部（工作時宜挽上袖口）,。