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wish細胞的傳代
wish細胞是上皮細胞,， 人羊膜細胞 ，培養(yǎng)基我用的是最常見的1640（10％小牛血清,，加雙抗）,。
1、細胞長滿培養(yǎng)瓶時既要傳代,。我用胰酶和edta的混合液消化,。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的終濃度是0.02%,。
2,、使用前37度預(yù)熱，每個25ml培養(yǎng)瓶加9滴的胰酶和edta混合液,，消化液的量可根據(jù)自己培養(yǎng)瓶的大小而定,，原則就是能夠蓋滿瓶底。加入胰酶和edta混合液以后,，為使酶的活性最大,，將培養(yǎng)瓶蓋擰緊后放回培養(yǎng)箱中，5分鐘左右即用含血清的培養(yǎng)基終止消化,。
如果在室溫情況下消化,，時間相應(yīng)加長，可以用手給培養(yǎng)瓶加溫,，是消化液發(fā)揮最大的作用,?？梢栽?a style="color: rgb(68, 68, 68); transition: all 0.3s ease 0s;">顯微鏡下觀察，當(dāng)細胞界限已十分清楚,，從梭形變圓,，即已分離為單個細胞，且有少量細胞漂起,，則要終止消化了,。
3、將消化液倒掉,，用eagle液洗滌一次,。然后倒掉。
4,、加少量1640,，用吸管輕輕吹打。
5,、吸1/3至1/4的細胞懸液接種至新的培養(yǎng)瓶,，然后加8ml的新的細胞培養(yǎng)基，置37度5％的二氧化碳培養(yǎng)箱完成傳代,。