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一、 菌種

(一),、細(xì)菌：大腸桿菌（Escherichia coli）,、枯草桿菌（Bacillus subtilis） 和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；

(二),、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）,、米曲霉（Aspergillus  oryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus  niger）,、葉點(diǎn)霉（Phyllosticta maydis ）和刺盤(pán)孢霉（Colletotrichum musae）

二,、 培養(yǎng)基

（一） 細(xì)菌培養(yǎng)液：LB

液體：胰蛋白胨10.0g  酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L    pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基，加15.0g瓊脂糖/L

(二),、真菌培養(yǎng)液：馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂  18.0g， 蒸餾水                1000mL pH 自然

三,、    器材

培養(yǎng)皿（90mm）,、濾紙、三角耙,、接種環(huán),、試管

四、 實(shí)驗(yàn)步驟

(一),、抑菌圈的測(cè)定(濾紙片法)

1,、菌種接種  將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次，使菌種新鮮,，細(xì)菌置30℃,，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,，霉菌置27℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,，備抗菌實(shí)驗(yàn)用

2,、菌懸液制備  在超凈臺(tái)里將轉(zhuǎn)接后生長(zhǎng)良好的菌種試管斜面注入適量無(wú)菌水(約5mL)，接種環(huán)輕刮菌落,，搖晃,，置旋渦混合器混勻。

3,、倒平板  在超凈臺(tái)里將培養(yǎng)基倒入平板,，每板約15mL左右，水平放置,，凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,，2d后觀察是否有菌落生長(zhǎng)，若沒(méi)有則可供下一步實(shí)驗(yàn)使用,，否則需重新倒平板,。

4、涂布在超凈臺(tái)里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,，放置5min左右后用三角耙涂布均勻,，每種菌設(shè)置兩個(gè)重復(fù)平板。

5,、貼片在超凈臺(tái)里將平板平均分為6個(gè)區(qū),，對(duì)角設(shè)置平行組，同時(shí)用無(wú)菌水做對(duì)照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽(yáng)性對(duì)照,。每?jī)蓮垶V紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,，用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后，取出貼在平板的位置,，輕摁一下使濾紙片牢固,，置(正放)4℃冰箱中放24h。

6,、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，細(xì)菌30℃，霉菌27℃,。細(xì)菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,，霉菌72h后觀察結(jié)果。

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