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一、 菌種

(一),、細菌：大腸桿菌（Escherichia coli）,、枯草桿菌（Bacillus subtilis） 和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；

(二),、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）,、米曲霉（Aspergillus  oryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus  niger）、葉點霉（Phyllosticta maydis ）和刺盤孢霉（Colletotrichum musae）

二,、 培養(yǎng)基

（一） 細菌培養(yǎng)液：LB

液體：胰蛋白胨10.0g  酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L    pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基,，加15.0g瓊脂糖/L

(二)、真菌培養(yǎng)液：馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂  18.0g,， 蒸餾水                1000mL pH 自然

三,、    器材

培養(yǎng)皿（90mm）、濾紙,、三角耙,、接種環(huán)、試管

四,、 實驗步驟

(一),、抑菌圈的測定(濾紙片法)

1、菌種接種  將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次,，使菌種新鮮,，細菌置30℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,，霉菌置27℃,，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d，備抗菌實驗用

2,、菌懸液制備  在超凈臺里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL),，接種環(huán)輕刮菌落，搖晃,，置旋渦混合器混勻,。

3、倒平板  在超凈臺里將培養(yǎng)基倒入平板,，每板約15mL左右,，水平放置，凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,，2d后觀察是否有菌落生長,，若沒有則可供下一步實驗使用，否則需重新倒平板,。

4,、涂布在超凈臺里用槍取0.1ml菌懸液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均勻,，每種菌設(shè)置兩個重復(fù)平板,。

5、貼片在超凈臺里將平板平均分為6個區(qū),，對角設(shè)置平行組,，同時用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照,。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼，用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,，取出貼在平板的位置,，輕摁一下使濾紙片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h,。

6,、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細菌30℃,，霉菌27℃,。細菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，霉菌72h后觀察結(jié)果,。

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