Proteintech PF00004 CCK-8試劑盒
Proteintech CCK-8試劑盒-常備現貨
產品貨號：PF00004
產品名稱：CCK-8試劑盒
產品規(guī)格：500T
產品簡介：
Cell Counting kit-8 簡稱 CCK8(或WST-8)試劑盒,，是一種基于 WST-8（化學名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,，4- 二磺基苯）-2H- 四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品說明：
WST-8工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比,。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映活細胞數量,。
WST-8 是 MTT 的一種升級替代產品,，和 MTT 或其它 MTT 類似產品如 XTT,、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先,，MTT 被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的,，需要有特定的溶解液來溶解；而 WST-8 和 XTT,、MTS 產生的 formazan 都是水溶性的,，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,，WST-8 產生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產生的 formazan 相比更易溶解,。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定,，使實驗結果更加穩(wěn)定,。另外，WST-8 和 MTT ,、XTT 等相比線性范圍更寬,，靈敏度更高。CCK-8 法應用非常廣泛,，如藥物篩選,、細胞增殖測定、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等,。
保存條件
4℃避光保存1年有效，-20℃避光保存2年有效,。
使用方法
1.制作標準曲線（測定細胞具體數量時）
1）先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,，然后接種細胞。
2）按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,，每組 3-6 個復孔。
3）接種后培養(yǎng) 2-4 h 使細胞貼壁,，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,，制作出一條以細胞數量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線,，根據此標準線可以測定未知樣品的細胞數量（使用此標準曲線的前提條件是實驗條件一致,，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間）。
2.細胞活性檢測
1）在 96 孔板中接種細胞懸液（100 uL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37 ℃, 5% CO2 ）,。
2）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡， 它們會影響 OD 值的讀數）,。
3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 h,。
4）用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度,。
5）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的HCl溶液或者1% w/v SDS 溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24 h 內測定，吸光度不會發(fā)生變化,。
3.細胞增殖毒性檢測
1）在 96 孔板中配置 100 uL的細胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 h （37 ℃，5% CO2 ）,。
2）向培養(yǎng)板加入 1-10 uL 不同濃度的待測物質,。
3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當的時間（例如：6、12,、24 或 48 h）,。
4）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）,。
5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 h,。
6）用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
7）若暫時不測定 OD 值,，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24 h 內測定,，吸光度不會發(fā)生變化。
注：如果待測物質有氧化性或還原性,，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉藥物影響,。若藥物影響比較小，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可,。
注意
1.第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間,。
2.接種時注意細胞懸液一定要混勻,，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不一致,。
3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。
4.建議采用多通道移液器,，減少平行孔間的誤差,，加 CCK-8 時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,，若插到培養(yǎng)基液面下加,，容易產生氣泡， 干擾 OD 值,。
5.若細胞培養(yǎng)時間較長,，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8,，含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測定,。
6.CCK-8 對細胞的毒性非常低，其他的實驗,，例如中性紅法或結晶紫法 ,，也可在 CCK-8 法檢測完后繼續(xù)進行。
7.可以使用大于 600 nm 的波長,，例如 650 nm ,，作為參考波長進行雙波長測定，CCK-8 在參考波長處沒有吸光值,，設定參考波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收,。
8.如果實驗中待測物質有氧化還原劑，在不含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物,，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內檢測,，和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較（只加 CCK-8 試劑），如果 OD 值明顯偏高,，則說明有反應,。
9.加 CCK-8 試劑時速度要快，減少試劑在移液器上的殘留,，加入 CCK-8 試劑后輕震培養(yǎng)板,，為了避免加樣時由于 CCK-8 殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋 CCK-8 試劑并混勻后加樣,。
10.CCK-8 反復凍融會增加背景值,，干擾實驗測定。
Proteintech CCK-8試劑盒-常備現貨
產品訂購信息
PF00004 CCK-8試劑盒 500T
PF00008 動物活細胞和死細胞的活力/細胞毒性檢測試劑盒(鈣黃綠素AM,，EthD-1方法） 300T
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