土壤酸性木聚糖酶（Soil Acidic Xylanase,，S-ACX）測定
試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖,，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖,，降低釀造中物料的粘度,，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖,，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX 一般分離自耐酸的真菌,，細(xì)菌及部分霉菌,。
測定原理：
ACX 在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進(jìn)一步在沸水浴條件下與 3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),，在 540nm 處有特征吸收峰,，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率,，可計(jì)算ACX 活力,。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BO6088-50T/24S | Storage |
緩沖液：液體 | 20ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 5ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 25ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存,，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水,，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周,；試劑四：粉劑×1 瓶,，4 ℃保存，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水,，混勻,，用不完的試劑 4℃保存一周,；自備儀器和用品：
天平、常溫離心機(jī),、震蕩儀,、恒溫水浴鍋，可見分光光度計(jì),、1 ml 玻璃比色皿,。
樣品處理：
新鮮土樣風(fēng)干，過 30-50 目篩,。
測定操作表：
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| 對(duì)照管 | 測定管 |
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土樣（g） | 0.1 | 0.1 |
緩沖液（μl） | 600 | 400 |
試劑一（μl） |
| 200 |
混勻,，50℃震蕩反應(yīng) 30min，立即 90℃水浴 10min,，8000g,，25℃離心 10min，取上清 500μl |
試劑二（μl） | 500 | 500 |
混勻,，90℃水浴中顯色 5min,，1ml 玻璃比色皿，對(duì)照管調(diào)零,，測定A540,。 |
S-ACX 計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983
酶活定義：50℃,，pH4.8 條件下,，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-ACX 活力（μmol/d/g 土樣）=（A540+0.002）÷ 2.5554×V 反總×103÷ W÷T÷ 150
= 75.14×（A540+0.002）÷ W
V 反總：反應(yīng)總體積,，0.6ml,；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d,；1000：1mmol/L =103μmol/L,；150：木糖分子量。
注意事項(xiàng)：
1. 保證震蕩反應(yīng) 30min,，使酶與底物充分接觸,。
2. 注意 90℃水浴防止爆開，以免改變反應(yīng)體系,。
