土壤植酸酶（phytase）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶,，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,，降低糞便中的磷含量,，減輕對(duì)環(huán)境的污染,，改善營養(yǎng)成分的吸收和利用,，因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值,。
測定原理：
植酸酶在一定溫度和pH 值條件下,，水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物，無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,，在 700nm 處有特征吸收峰,，根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BO6092-50T/24S | Storage |
緩沖液：液體 | 60ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1 瓶 | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 30ml | 4℃ |
顯色劑：粉劑 | 6 瓶 | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑一：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存,，臨用前加緩沖液 30ml 配制，現(xiàn)用現(xiàn)配,；用不完的試劑 4℃保存一個(gè)月,。
顯色劑：粉劑×6 瓶，4℃避光保存,，臨用前根據(jù)用量每瓶加 1ml 雙蒸水溶解,，再加 4ml 試劑二混勻。
自備儀器和用品：
天平,、低溫離心機(jī),、可見分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿,、恒溫水浴鍋,，甲苯（不允許快遞）,。
樣本處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩,。
測定操作表：
| 樣本（g） | 0.06 | 0.06 |
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甲苯 | 40 | 40 |
振蕩混勻,，室溫放置 15min |
緩沖液（µl） | 1000 |
|
試劑一（µl） |
| 1000 |
混勻，37℃孵育 24h,，10000g,，4℃離心 5min，取上清 |
上清 | 500 | 500 |
顯色劑（µl） | 500 | 500 |
混勻,，靜置 15min,，測定 700nm 處吸光值，△A=A 測定管-A 對(duì)照 管,。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。 |
酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.759x + 0.0084，R2 = 0.9977,；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml ）,，y 為吸光值△A。
酶活性定義：在 37℃,，pH5.5 的條件下,，每克土樣每小時(shí)從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/h /g 土樣）=（△A-0.0084）÷1.759×V 反總÷W÷T
=0.41×（△A-0.0084）
V 反總：反應(yīng)總體積,，1.04ml ,；T：反應(yīng)時(shí)間，24h,；W：樣本質(zhì)量,，0.06g。
注意事項(xiàng)：
1,、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,，每一瓶是 5 個(gè)樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期,，應(yīng)放棄使用,。
2、ΔA 線性范圍為 0.01-1,。
