脫氫抗壞血酸（dehydroascorbate,，DHA）含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
AsA 作為植物細胞一個重要生理指標,，其 AsA 的含量,、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA 比率)及其合成與代謝相關酶類活性的變化涉及植物對一系列環(huán)境脅迫的響應,。DHA 是AsA 的可逆的氧化型，在生物體內(nèi),，與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng),，具有電子受體的作用。
測定原理：
DTT 還原DHA 生成AsA,，通過測定體系中AsA 的生成速率,，即可計算出 DHA 含量。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BW6001-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 50ml | 室溫 |
試劑二：液體 | 40ml | 室溫 |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
標準品：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑三：粉劑×1 瓶,，4℃保存,。臨用前加入 10ml 蒸餾水充分溶解。
標準品：粉劑×1 瓶,， 4℃保存,。臨用前加入 5.743 ml 蒸餾水充分溶解；吸取 0.1 ml 上述溶液,，加入 0.9 ml蒸餾水,，混勻，即為 100μmol/L DHA。
自備儀器和用品：
低溫離心機,、紫外分光光度計,、1ml 石英比色皿、可調(diào)式移液器,、研缽、冰和蒸餾水,。
樣品中 DHA 提?。?/span>
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿,。12000g,，4℃離心 20min，取上清置冰上待測,。
2. 細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲 3 秒,，間隔 7 秒，總時間 3min）,；12000g,， 4℃離心 10min，取上清液置于冰上待測,。
3. 血清等液體：直接測定,。
DHA 測定操作：
1. 分光光度計預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 265 nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預熱 30 min。
3. 標準管：依次在 1ml 石英比色皿加入 100μl 標準液,、800μl 預熱的試劑二和 100μl 試劑三,，迅速混勻后于 265nm 比色，記錄 10s 和 130s 的吸光值A1 和A2,，△A 空白管=A2-A1,。
4. 測定管：依次在 1ml 石英比色皿加入 100μl 上清液、800μl 預熱的試劑二和 100μl 試劑三,，迅速混勻后于 265nm 比色,，記錄 10s 和 130s 的吸光值A3 和A4，△A 測定管=A4-A3,。
注意：標準管只需測定一次,。
計算公式：
(1). 按蛋白濃度計算
DHA(nmol/mg prot) =[C 標準液×△A 測定管÷△A 標準管×V 標準]÷（Cpr×V 樣）
=100×△A 測定管÷△A 標準管÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C 標準液×△A 測定管÷△A 標準管×V 標準]÷(W×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測定管÷△A 標準管÷W
(3). 按細胞數(shù)量計算
DHA(nmol/104 cell) =[C 標準液×△A 測定管÷△A 標準管×V 標準]÷(W×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測定管÷△A 標準管÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
DHA(nmol/ml) =[C 標準液×△A 測定管÷△A 標準管×V 標準]÷V 樣
=100×△A 測定管÷△A 標準管
C 標準液：100μmol/L；V 標準：加入反應體系中標準液體積，0.1ml,；V 樣總：上清液總體積,，1.0 ml=0.001 L；V 樣：加入反應體系中上清液體積,，0.1ml,；W：樣品質量，g,。
注意事項：
1. 臨用前配制的試劑未使用完的 4℃保存,，3 天內(nèi)使用完。
2. *低檢出限為 10μmol/L,。
