阿拉丁 R301899-100ml RIPA裂解液（強）
阿拉丁 RIPA裂解液（強）-常備現(xiàn)貨
產(chǎn)品貨號：R301899-100ml
產(chǎn)品名稱：RIPA裂解液（強）
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
產(chǎn)品簡介：
規(guī)格或純度：無抑制劑
英文名稱：RIPA Lysis Buffered Solution(Strong)
儲存溫度：2-8°C儲存
運輸條件：冰袋運輸
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳動物細胞中抽取可溶性蛋白,，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞,。按照其裂解液的強度可以分為強,、中、弱三類,，可根據(jù)實驗需求選擇相應產(chǎn)品,。RIPA裂解液(強)可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白,，提取的蛋白可應用于蛋白定量,、Western Blot,、IP等檢測分析,。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
阿拉丁 RIPA裂解液（強）-常備現(xiàn)貨
使用方法
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
1.取本品置于室溫溶解混勻,，根據(jù)實驗要求加入酶抑制劑。
2.去除貼壁細胞的培養(yǎng)液,，用 PBS,、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心,，棄上清,，留取沉淀。
3.按照 6 孔板每孔加入150～250μl 含有酶抑制劑的裂解液的比例,，加入本品,。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸,。置于冰上或 4℃裂解,，通常裂解液作用于細胞 1～3s 內(nèi)，細胞就會被裂解,。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200～250μl。
4.10000～12000g,，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可)，取上清,。
5.后續(xù)的 SDS-PAGE,、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1.取本品置室溫溶解混勻后,，加入酶抑制劑。
2.低速離心懸浮細胞,，棄上清,，收集沉淀。
3.用手指輕彈細胞,，使其松散,。按照 6 孔板每孔細胞加入150～250μl含有酶抑制劑的裂解液的比例，加入本品,。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞,，充分裂解后應沒有明顯的細,、胞沉淀,。
4.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可),，取上清。
5.進行后續(xù)的 SDS-PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
1.取本品置于室溫溶解混勻后,，加入酶抑制劑,。
2.把組zhi剪切成細小的碎片，越小越好,。
3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織,，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min 之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。
4.按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有酶抑制劑的裂解液,。冰上或4℃裂解 15～30min,。
5.步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有酶抑制劑的本品,。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。
6.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可)，取上清,。
7.進行后續(xù)的 PAGE,、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。
注意事項
1.去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后,，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗,。
2.如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量,。
3.如果細胞量較多,，必需分裝成 50～100 萬細胞/離心管,，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,，相對比較容易裂解充分,。
4.如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈 Vorte× 使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器,，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5.在低溫情況下有可能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象,，可 37℃水浴促其溶解，不會影響使用效果,；溶解時間不易過長,，避免有效成分失效,。
6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復合物,。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下,，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。
7.細胞裂解的操作步驟，應置于冰上或 4℃進行,。
使用范圍
適用于一般生物學及醫(yī)學研究
產(chǎn)品訂購信息：
R301899-100ml RIPA裂解液（強） 100ml
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