Proteintech  PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：PK10030

產(chǎn)品名稱：通用型總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格： 50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Proteintech 通用型總蛋白提取試劑盒（PK10030）適用于提取各種動(dòng)物、植物的細(xì)胞或組織樣品中的總蛋白,，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品中的總蛋白的提取,，此款試劑盒提供的裂解液，能夠高效地提取總蛋白,，主要包括細(xì)胞質(zhì),、細(xì)胞膜、細(xì)胞核,、核基質(zhì),、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、高爾基體等蛋白,，得到的總蛋白樣品可用于蛋白免疫印跡、免疫沉淀,、Co-IP,、ELISA檢測(cè)，蛋白質(zhì)分析和小規(guī)模蛋白層析純化等其他應(yīng)用,。

 具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品說(shuō)明：

關(guān)于試劑盒

●本試劑盒是一款廣譜、通用型的總蛋白的提取試劑盒,，可用于大部分蛋白的提?。欢鴮?duì)于一些低表達(dá)、易降解,、磷酸化修飾,、疏水性蛋白等特殊蛋白質(zhì)的提取推薦選用其對(duì)應(yīng)的專用提取試劑盒（見下表）。

●用于Co-IP實(shí)驗(yàn)的樣品不要對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理,，也可將裂解液換成專用的Co-IP裂解液（PR20037）,，提升提取效果。

●裂解液在使用前需添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物,。

●樣品制備完成后及時(shí)使用或分裝保存在-80℃。

●試劑盒開封后,，裂解液可長(zhǎng)期保存于4-8℃,，SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（4X）推薦分裝-20℃保存，試劑盒過期后建議不要使用,。

使用方法

1,、細(xì)胞樣品

a、瓶?jī)?nèi)裂解法（效果zui 佳）：適用于所有的貼壁細(xì)胞

  （1）吸凈培養(yǎng)基,，用冰的PBS清洗細(xì)胞表面2遍（動(dòng)作輕柔，防止細(xì)胞脫落）,，盡可能吸取殘留的PBS,。

（2）在冰上按每1000萬(wàn)細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）于細(xì)胞瓶、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中,，用移液管吹散貼壁的細(xì)胞,，對(duì)于貼壁緊的細(xì)胞也可使用細(xì)胞刮收集，收集裂解液,，在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

b,、離心法：適用于懸浮細(xì)胞和藥物處理過的細(xì)胞

（1）使用細(xì)胞刮收集細(xì)胞懸液（連同培養(yǎng)基一起收集）,，4℃，500 g離心5 min,，收集沉淀,，沉淀用預(yù)冷的PBS洗滌兩遍,，收集細(xì)胞沉淀，盡可能吸取殘留的PBS,。

（2）按每1000萬(wàn)細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液,，在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次,。

注：（1）細(xì)胞的收集優(yōu)先使用瓶?jī)?nèi)裂解法處理,，瓶?jī)?nèi)裂解法可以有效的防止細(xì)胞在離心過程中破碎，能有效地提高總蛋白得率,，同時(shí)也能保留細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）,。

（2）對(duì)于藥物處理過的貼壁細(xì)胞則推薦使用離心法收集，因?yàn)樗幬锾幚磉^的細(xì)胞往往貼壁不牢,，在PBS清洗階段容易丟失,。

（3）不推薦使用yi酶消化，yi酶消化細(xì)胞不僅會(huì)造成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的wan全丟失,，同時(shí)會(huì)剪切一些對(duì)yi酶敏感的蛋白,。

（4）一些細(xì)胞粘度高（HEK-293）和密度高的懸浮細(xì)胞（Jurkat、K562等）在加入細(xì)胞裂解液后容易形成絮狀物,，此時(shí)應(yīng)及時(shí)的使用超聲破碎儀將其打散,。

2、組織樣本

a,、采集與保存：

（1）采集組織樣本前先對(duì)動(dòng)物去除血液（血液去除越干凈越好）,，接著迅速解剖,，采集所需要的組織樣本,。

（2）組織樣本如需保存，可將采集的組織樣本液氮速凍,，然后轉(zhuǎn)移至-80℃保存,。

（3）取樣順序：最先取胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織，接著取肺（巨噬細(xì)胞含量高）,、肝臟（蛋白種類多）,、膀胱、生殖系統(tǒng)相關(guān)的組織（睪丸,、卵巢,、子宮、輸卵管等）,，最后取心臟,、脾臟、腎臟,、骨骼肌,、大小腦等組織,。胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織推薦現(xiàn)取現(xiàn)制備，選用易降解蛋白提取試劑盒（PK10024)提取,。

b,、清洗

（1）對(duì)于血液含量豐富的組織樣本如：心臟、肝臟,、脾臟,、肺、腎臟等組織,，剪碎使用冰的PBS洗滌液清洗2-3遍（可以適當(dāng)按壓排出血液）,，直至樣本血紅色變淺，濾紙吸干水分稱重,。

（2）對(duì)于脂肪含量豐富的組織樣本,，預(yù)先把樣本放在幾層紙巾上按壓，去除部分脂類,，然后再使用冰的PBS清洗1-2遍,，濾紙吸干水分稱重。

c,、破碎及裂解

（1）液氮研磨法：將剪碎的組織塊在研缽中加入液氮,，快速研磨至細(xì)粉狀，轉(zhuǎn)移至EP管中,，按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）,，使用移液器上下吹打混勻，直至wan全溶解,。在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

  （2）勻漿法：按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）,，將樣品轉(zhuǎn)移到合適大小的預(yù)冷玻璃勻漿器中,，在冰浴條件下對(duì)樣品勻漿30-50次。在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次,。

注：不同的樣品所需勻漿次數(shù)不同。鑒定方法：取20 ul勻漿30次后的組織樣品,，加入等體積的0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液,，混勻，在顯微鏡下觀察臺(tái)盼藍(lán)溶液染色陽(yáng)性（藍(lán)色）細(xì)胞數(shù)目的比例,，當(dāng)陽(yáng)性（藍(lán)色）細(xì)胞wan全破碎,，即可停止勻漿。若陽(yáng)性（藍(lán)色）細(xì)胞破碎不wan全,，則可適當(dāng)增加5-10次勻漿,，隨后按照同樣的方法使用臺(tái)盼藍(lán)溶液進(jìn)行鑒定,。

 （3）冷凍研磨機(jī)法：提前開啟冷凍研磨機(jī)預(yù)冷，將吸干水分的組織樣本剪成1-2 mm左右的小塊,，按照每管100 mg分裝到2 mL離心管,，同時(shí)每管加入1粒5 mm的研磨珠。將離心管和適配器放入液氮里浸泡速凍,。將離心管和適配器轉(zhuǎn)移到冷凍研磨機(jī),，使用65 Hz研磨45s，如果研磨效果不理想可中斷15s后重復(fù)研磨一次,。每管加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）,，使用移液器上下吹打混勻，直至wan全溶解,。在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

注：（1）優(yōu)先推薦選用液氮研磨法和冷凍研磨機(jī)法,，其破碎效果zui 佳,；如選用勻漿法，需在冰水浴中對(duì)樣品進(jìn)行勻漿,。

（2）使用冷凍研磨機(jī)法對(duì)液氮速凍過的樣本進(jìn)行破碎,，對(duì)離心管的材質(zhì)要求比較高，需選用專用的離心管,。

3,、昆蟲樣本

     將昆蟲清洗干凈，使用液氮研磨法,、勻漿法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎,，按每50-100 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次,。

4,、植物樣本

   將植物清洗干凈,，使用液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎（越碎越好），按每100-200 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）,，在冰上放置30 min,，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

   注：植物樣本不推薦使用勻漿法,，液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法中液氮對(duì)破碎植物的細(xì)胞壁有非常好的效果,。

5、超聲處理

   將裂解的蛋白樣品放在冰上超聲破碎,，200W,，2 min（開2s,，關(guān)2s），充分打斷核酸序列（用于Co-IP實(shí)驗(yàn)的樣品不要對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理）,。

6,、樣品的使用與保存。

6.1  用于免疫沉淀,、ELISA等非變性蛋白分析實(shí)驗(yàn),，4℃，10000 g離心5 min分離上清,，取部分樣品用來(lái)測(cè)濃度,，剩下的蛋白樣品可直接分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃。

6.2  用于免疫印跡的變性蛋白分析實(shí)驗(yàn),，取部分樣品用來(lái)測(cè)濃度,，剩下的蛋白樣品按照3:1比例，混合蛋白樣品和SDS-PAGE上樣緩沖液,。100℃沸水浴加熱5 min,，以充分變性蛋白。冷卻至室溫后,，4℃,，10000 g離心5 min分離上清，可直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔或分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃,。

注：用于免疫印跡的變性蛋白分析,，在加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮樣后再離心，可提高總蛋白的得率,。

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒  50T/100T

PK10021  動(dòng)物組織總蛋白提取試劑盒  30T