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葉綠體是光合作用的細(xì)胞器,，在光合作用研究中,，常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作，葉綠體中所含的色素主要有兩大類

,，葉綠素(包括葉綠素a和葉綠素b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素),，它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復(fù)合

體,，其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll),；類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物，給植物和動物提供天然色素

,，是重要的抗氧化劑,，并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素，類胡蘿卜素可預(yù)防細(xì)胞,，組織和基因損毀,，增強身體免疫系統(tǒng)，抵御感染,，

減少癌癥風(fēng)險,，保護(hù)心臟。

類胡蘿卜素(Carotenoid)檢測試劑盒(比色法)檢測原理是類胡蘿卜素不溶解于水,，而溶于有機(jī)溶劑,，以有機(jī)溶劑粗提類

胡蘿卜素，根據(jù)朗伯-比爾定律,，某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比,，即A=αCL，其中α為比例常

數(shù),，當(dāng)溶液濃度以百分比濃度為單位,，層液厚度為1cm時，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù),。在本試劑盒情況下葉綠素a,、葉綠素b、

類胡蘿卜素分別在665nm,、649nm,、470nm處有最大吸收波,，根據(jù)經(jīng)驗公式可計算出葉綠素a、葉綠素b,、總?cè)~綠素,、類胡蘿卜

素含量，主要用于植物組織中葉綠素,、類胡蘿卜素的提取以及以酶標(biāo)儀定量檢測葉綠素a,、葉綠素b、總?cè)~綠素,、類胡蘿卜素含量

,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1,、蒸餾水

2、電子天平,、研缽或勻漿器,、離心管或試管

3、低溫離心機(jī),、恒溫箱或水浴鍋,、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1,、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,，4℃ 10000r/min

離心15~20min,，留取上清液，-20℃凍存,，用于苯丙氨解氨酶的檢測,。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿,、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測,。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min,，取上清液,，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測,。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2,、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對照孔,、測定孔,，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡,。如果樣品中的PAL活性過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,，

求平均值,。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零),，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案),，以對照孔為對照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1,、待測樣品中不能含有酶抑制劑,，同時需避免反復(fù)凍融。

2,、獲得上清液為PAL酶液,，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存,。

3,、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積,。

4、每次檢測指標(biāo)不宜過多,，否則操作時間不一,，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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