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茶多酚(Tea Polyphenols,，TP)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱,，包括黃烷醇類、花色苷類,、黃酮類,、黃酮醇類和酚酸類等，

是一類兒茶素為主體的黃酮化合物,，兒茶素占60~80%,，具有C6-C3-C6碳骨架結(jié)構(gòu)，是一種重要的天然抗氧化物質(zhì),，

能夠清除自由基,。類物質(zhì)茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一,，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一

,，研究表明茶多酚等活性物質(zhì)具解毒和抗輻射作用，能有效地阻止放射性物質(zhì)侵入骨髓,，并可使鍶90和鈷60迅速排出體外,。

茶多酚(TP)檢測(cè)試劑盒(酒石酸鐵比色法)檢測(cè)原理是以酒石酸鐵為底物，利用茶多酚與酒石酸鐵反應(yīng),，生成穩(wěn)定紫藍(lán)色

化合物,，以酶標(biāo)儀540nm處測(cè)定吸光度，在一定范圍內(nèi)吸光度與顏色深淺的變化成正比,，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較進(jìn)而計(jì)算茶多酚含量,，

主要用于測(cè)定植物組織、血清等樣品中茶多酚含量,，尤其適用于測(cè)定茶葉中茶多酚含量,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，

不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1,、蒸餾水

2、電子天平,、研缽或勻漿器,、離心管或試管

3、低溫離心機(jī),、恒溫箱或水浴鍋,、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1,、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,，加入2.5ml PAL Lysis Buffer,，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min,，留取上清液,，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè),。

②血漿,、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定,，-20℃凍存,，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液,，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè),。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板,，按照下表設(shè)置對(duì)照孔,、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并

注意避免產(chǎn)生氣泡,。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔,，

求平均值。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3,、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零),，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案),，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1,、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑,，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液,，應(yīng)盡快檢測(cè),，亦可-20°℃保存。

3,、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積,。

4,、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一,，有可能導(dǎo)致樣本間的差異,。5、為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

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