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活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羥基自由基,、超氧自由基和過氧化氫,。在細胞或組織的正常生理代謝過程中會

產(chǎn)生活性氧，同時一些環(huán)境因子例如紫外照射,、環(huán)境污染等也可以誘導活性氧的產(chǎn)生,，活性氧產(chǎn)生后可以導致細胞內(nèi)脂、

蛋白和DNA等的氧化損傷,，誘發(fā)氧化應(yīng)激(Oxidative stress),，繼而導致各種腫瘤、動脈粥樣硬化,、風濕性關(guān)節(jié)炎,、糖尿病、

肝損傷,、以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等,。機體中存在多種抗氧化物，包括抗氧化大分子,、抗氧化小分子和酶等,，可以清除體內(nèi)產(chǎn)生的

各種活性氧，以阻止活性氧誘導的氧化應(yīng)激(oxidative stress)的產(chǎn)生,；一個體系內(nèi)的各種抗氧化大分子,、抗氧化小分子和酶的總

的水平即體現(xiàn)了該體系內(nèi)的總抗氧化能力，因此測定血漿,、血清,、尿液、唾液等各種體液,，細胞或組織等裂解液中的總抗氧化

能力具有非常重要的生物學意義,。

總抗氧化能力(T-AOC)檢測試劑盒即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method，

簡稱T-AOC Assay Kit,，是一種采用ABTS作為顯色劑,，可以對血漿、血清,、唾液,、尿液等各種體液,，細胞或組織等裂解液、

植物或中草藥抽提液,、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進行檢測的試劑盒,；ABTS法測定T-AOC的檢測原理是

在氧化劑作用下ABTS被氧化成綠色的ABTS?+，在抗氧化物存在時ABTS?+的產(chǎn)生被抑制,，可在734nm或405nm測定ABTS?+的

吸光度即可測定并計算出樣品的總抗氧化能力,。Trolox是一種維生素E的類似物，具有和維生素E相似的抗氧化能力,，

可作為其它抗氧化物總抗氧化能力的參考,，例如Trolox的總抗氧化能力為1，相同濃度情況下,，其它物質(zhì)的抗氧化能力可用其抗氧

化能力和Trolox相比的倍數(shù)來表示,，該試劑盒快捷方便，加入待測樣品3~6分鐘即可進行吸光度測定,，

通常10~20個樣品可以在20分鐘內(nèi)檢測完畢,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1,、蒸餾水

2、電子天平,、研缽或勻漿器,、離心管或試管

3、低溫離心機,、恒溫箱或水浴鍋,、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1,、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,，4℃ 10000r/min

離心15~20min,，留取上清液,，-20℃凍存,，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿,、血清和尿液樣品︰血漿,、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存,，用于苯丙解氨的檢測,。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液,，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min,，取上清液,，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測,。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板,，按照下表設(shè)置對照孔,、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并

注意避免產(chǎn)生氣泡,。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3,、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零),，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案),，以對照孔為對照調(diào)零,，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1,、待測樣品中不能含有酶抑制劑,，同時需避免反復(fù)凍融。

2,、獲得上清液為PAL酶液,，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存,。

3,、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積,。

4、每次檢測指標不宜過多,，否則操作時間不一,，有可能導致樣本間的差異,。5、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

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