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Bromelain)簡(jiǎn)稱菠蘿酶,，亦稱鳳梨酶、鳳梨酵素等,，是存在于菠蘿植株中的蛋白水解酶,，可從菠蘿果莖、葉,、皮提

取出來(lái),，經(jīng)精制、提純,、濃縮,、酶固定化、冷凍干燥而得到,，菠蘿蛋白已被廣泛應(yīng)用于食品,、醫(yī)藥等行業(yè)，利用吸附力,、離

子鍵,、共價(jià)鍵等不同的聯(lián)結(jié)方式,，將酶與不溶性載體聯(lián)結(jié)制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活,，易于儲(chǔ)存運(yùn)輸,。

檢測(cè)試劑盒(福林微板法)檢測(cè)原理是通過(guò)菠蘿蛋白催化底物酪蛋白水解生成酪氨，酪氨含有酚羥基,，

可與福林試劑發(fā)生福林反應(yīng),，即福林試劑在堿性條件下容易定量的被酚類化合物還原，生成鎢藍(lán)和鉬藍(lán)的混合物呈現(xiàn)不同深淺的

藍(lán)色,，于酶標(biāo)儀680nm處檢測(cè)吸光度,，吸光度的大小與酪氨含量的多少有關(guān)，吸光度大說(shuō)明酪氨含量高,，也就是說(shuō)菠蘿蛋白

分解的酪蛋白多,，酶活性高，主要用于檢測(cè)植物組織尤其是菠蘿勻漿液中菠蘿蛋白的活性,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，

不適用于臨床診斷或其他用途。

 操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1,、蒸餾水

2,、電子天平、研缽或勻漿器,、離心管或試管

3,、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋,、酶標(biāo)儀,、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,，加入2.5ml PAL Lysis Buffer,，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min,，留取上清液,，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè),。

②血漿,、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定,，-20℃凍存,，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,，4℃ 10000r/min離心15~20min,，取上清液，

-20℃凍存,，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè),。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2,、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔,、測(cè)定孔,，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡,。如果樣品中的PAL活性過(guò)高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔,，

求平均值,。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零),，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1),。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度,。

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑,，同時(shí)需避免反復(fù)凍融,。

2、獲得上清液為PAL酶液,，應(yīng)盡快檢測(cè),，亦可-20°℃保存。

3,、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積,。

4,、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一,，有可能導(dǎo)致樣本間的差異,。5,、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

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