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5?-核苷酸酶(5?-NT或NTP)廣泛分布于肝臟,、膽道及其他各種組織中，該酶活性變化常與ALP活性相平行,。但在骨骼系統(tǒng)的疾病

中,，如腫瘤骨轉移、畸形性骨炎,、甲亢,、佝僂病等，ALP活力增高,，但是5?-NT活力正常,，所以對于ALP活力提高的情況，

測定5?-NT活力有助于判斷ALP活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病,。

5′-核苷酸酶(5′-NT)檢測試劑盒(鉬藍微板法)的檢測原理為5?-核苷酸酶能催化5?-磷酸腺苷(AMP)水解,，生成腺苷和

磷酸，后者與鉬酸銨反應生成鉬藍,，可用比色法測定無機磷的含量,，計算5?-NT活性，利用鎳離子能選擇性的抑制5?-NT的特性

,，在測定管不加人抑制劑鎳離子,，測出的活性為ALP和5?-NT總活性，在對照管加入鎳離子，可以測出ALP的活性,，

測定管的酶活性減去對照管的酶活性即獲得5?-NT活性,，通過酶標儀檢測680nm處吸光度。5?-核苷酸酶的檢測對于研究自由基

代謝平衡,，抗衰老和腫瘤發(fā)病機制具有一定的價值,。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1,、蒸餾水

2、電子天平,、研缽或勻漿器,、離心管或試管

3、低溫離心機,、恒溫箱或水浴鍋,、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1,、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,，4℃ 10000r/min

離心15~20min,，留取上清液，-20℃凍存,，用于苯丙氨解氨酶的檢測,。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿,、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測,。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液,，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min,，取上清液,，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測,。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2,、PAL加樣∶

取96孔板,，按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入,，并

注意避免產(chǎn)生氣泡,。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,，樣品的檢測最好能設置2平行孔,，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3,、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零),，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案),，以對照孔為對照調(diào)零,，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟,，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1,、待測樣品中不能含有酶抑制劑,，同時需避免反復凍融。

2,、獲得上清液為PAL酶液,，應盡快檢測，亦可-20°℃保存,。

3,、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,，但應注意比色杯的最小檢測體積,。

4、每次檢測指標不宜過多,，否則操作時間不一,，有可能導致樣本間的差異。5,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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