目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測試劑盒>> TE0158乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | TE0158 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥,綜合 |
乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,，LDH或LD)屬于氧化還原酶,，能夠催化氫氧原子或電子從一中底物轉移到另一種底物上乳
酸脫氫酶是糖酵解和糖異生的一個極其重要的酶，含有鋅離子,，廣泛分布于人和動物組織,、植物和微生物中，能可逆的催化乳
酸(L)和丙酮S(P)之間的氧化還原反應,。其反應公式：乳酸+NAD+→丙酮s+NADH+H+,。其中：L→P為正向反應；
P→L為逆向反應,。
乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒是利用乳酸脫氫酶催化上述正反應,，即L-乳酸+NAD+→丙酮S+NADH+H+
,，在上述反應過程中乳酸氧化成丙酮S,，同時NAD+氧化成NADH，引起340nm處吸光度的升高,，其升高速率與樣品中LDH活性
呈正比關系,，通過分光光度計或自動分析儀檢測340nm處吸光度升高速率，通過計算獲得乳酸脫氫酶的活性,。該LD-L法的優(yōu)點
是：1,、乳酸鹽和NAD+底物溶液的穩(wěn)定性比LD-P法中的
和NADH底物溶液好；2,、線性速率反應時間范圍較寬,；3、重復性比LD-P法和二硝基苯肼法好,；4,、準確性比二硝基苯肼法好；
5,、適用于自動分析儀,。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。
自備材料：
1,、蒸餾水
2、離心管
3,、水浴鍋或恒溫箱
4,、96 孔板、酶標儀
操作步驟(僅供參考)：
1,、準備樣品：
①血漿,、血清樣品：血漿,、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定,，-20℃
保存 1 個月有效,，用于 ALT/GPT 的檢測。
②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行勻漿,，低速離心取上清,，-20℃保存 1 個月有效，
用于 ALT/GPT 的檢測,。
③(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,，以便于后續(xù)計算單
位蛋白重量組織或細胞內的 ALT/GPT 含量。
2,、 制作 ALT 標準曲線：取丙酮S標準 1 支,，準確加入標準稀釋液 1ml，充分混勻,，
即配制成丙酮標準(100mmol/L),，4℃保存?zhèn)溆谩ＥR用前,，按丙酮標準(100mmol/L)：丙
酮S標準稀釋液=1：49 的比例混合,，即為丙酮標準工作液-丙酮標準(2mmol/L)，以 96
孔板,，按下表制備標準曲線,，最好設定平行檢測孔，求平均值,。
混勻,，向各管中加入苯肼顯色液 20ul，混勻,，37℃孵育 20min,，加入 ALT 顯色基液 200ul，
混勻,。室溫放置 5min,，以蒸餾水調零，酶標儀 505nm 處讀取各管吸光度,。各管吸光度均減
去"0"號管吸光度,，所得吸光度差值(縱坐標)與對應的卡門酶活力單位(橫坐標)作圖。注意：
標準品用分光光度計檢測參考值在 0.3~0.9 之間,，加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至
棕紅色,，應及時檢測，隨著時間的延長其顏色會加深,，由于檢測儀器,、操作手法等條件的不
同,，參考值范圍會有波動。
3,、 ALT 加樣：按照下表設置對照孔,、測定孔，溶液應按照順序依次加入,，并注意避免產生
氣泡,。如果樣品中的 ALT 酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,。
4,、 ALT 測定：混勻，室溫放置 5min,，以蒸餾水調零,，酶標儀 505nm 處測定對照管、測定
管的吸光度(即為 A 對照,、A 測定),，如無 505nm 可選擇 500~520nm。
計算：以系列標準孔活力卡門單位為橫坐標,，以對應的吸光度為縱坐標,，繪制標準曲線,，以
(A 測定－A 對照)之差值,，從標準曲線查得 ALT 活力卡門單位
參考范圍：成年健康人血清 ALT：5~25 卡門單位/ml
注意事項：
1、苯肼顯色液溶解以后,，如果仍然有結晶析出,，應過濾后使用或棄用。
2,、由于賴氏法的特點,，在繪制標準曲線時每個點最好做 3 管的重復測定，求出各標準管的
吸光度均值,，減去“0"號管吸光度均值,，對照賴氏單位繪制標準曲線。
3,、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天,，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個月,。
4,、成批樣本測定時一般無需每份樣本都做自身血清對照，以試劑空白管代替即可,。
5,、對于超過正常范圍的血清樣本,，應該進行復測，復測時每份樣本都應做自身血清對照,。
6,、嚴重黃疸、脂血或溶血的血清,，可能會引起測定管吸光度增高,，因此檢測該類樣本時應
做自身血清標本對照。
7,、當樣本的酶活力大于 150 卡門單位時,，應將樣本進行 5~10 倍稀釋后再行測定。
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