目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測(cè)試劑盒>> TE0123氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒
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更新時(shí)間:2024-11-01 09:56:55瀏覽次數(shù):187評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
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貨號(hào) | TE0123 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶,氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)舊稱谷丙(GPT)主要存在于肝細(xì)胞漿
內(nèi),,細(xì)胞內(nèi)ALT濃度遠(yuǎn)高于血清,,肝細(xì)胞破壞后血清ALT立即迅速升高,因此谷ALT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的
檢測(cè)指標(biāo),。
氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒其檢測(cè)原理是ALT催化丙氨S與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng),,
二硝基苯肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的二硝基苯腙,在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異,,酶標(biāo)儀檢測(cè)在500~520nm處差
異最大,,以等摩爾濃度計(jì)算出的生成量,進(jìn)而計(jì)算酶的活性,。100T該檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)50個(gè)樣本(不含標(biāo)準(zhǔn)品),,
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途,。
自備材料:
1,、蒸餾水
2、離心管
3,、水浴鍋或恒溫箱
4,、96 孔板、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考):
1,、準(zhǔn)備樣品:
①血漿,、血清樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,,-20℃
保存 1 個(gè)月有效,,用于 ALT/GPT 的檢測(cè)。
②細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿,,低速離心取上清,,-20℃保存 1 個(gè)月有效,
用于 ALT/GPT 的檢測(cè),。
③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度,,以便于后續(xù)計(jì)算單
位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 ALT/GPT 含量。
2,、 制作 ALT 標(biāo)準(zhǔn)曲線:取丙酮S標(biāo)準(zhǔn) 1 支,,準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 1ml,充分混勻,,
即配制成丙酮標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L),,4℃保存?zhèn)溆谩ER用前,,按丙酮標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L):丙
酮S標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:49 的比例混合,,即為丙酮標(biāo)準(zhǔn)工作液-丙酮標(biāo)準(zhǔn)(2mmol/L),以 96
孔板,,按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,,最好設(shè)定平行檢測(cè)孔,求平均值,。
混勻,,向各管中加入苯肼顯色液 20ul,混勻,,37℃孵育 20min,,加入 ALT 顯色基液 200ul,
混勻,。室溫放置 5min,,以蒸餾水調(diào)零,酶標(biāo)儀 505nm 處讀取各管吸光度,。各管吸光度均減
去"0"號(hào)管吸光度,,所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對(duì)應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。注意:
標(biāo)準(zhǔn)品用分光光度計(jì)檢測(cè)參考值在 0.3~0.9 之間,,加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至
棕紅色,,應(yīng)及時(shí)檢測(cè),隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其顏色會(huì)加深,,由于檢測(cè)儀器,、操作手法等條件的不
同,,參考值范圍會(huì)有波動(dòng)。
3,、 ALT 加樣:按照下表設(shè)置對(duì)照孔,、測(cè)定孔,,溶液應(yīng)按照順序依次加入,,并注意避免產(chǎn)生
氣泡。如果樣品中的 ALT 酶活性過(guò)高,,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,。
4、 ALT 測(cè)定:混勻,,室溫放置 5min,,以蒸餾水調(diào)零,酶標(biāo)儀 505nm 處測(cè)定對(duì)照管,、測(cè)定
管的吸光度(即為 A 對(duì)照,、A 測(cè)定),如無(wú) 505nm 可選擇 500~520nm,。
計(jì)算:以系列標(biāo)準(zhǔn)孔活力卡門單位為橫坐標(biāo),,以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,以
(A 測(cè)定-A 對(duì)照)之差值,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得 ALT 活力卡門單位
參考范圍:成年健康人血清 ALT:5~25 卡門單位/ml
注意事項(xiàng):
1、苯肼顯色液溶解以后,,如果仍然有結(jié)晶析出,,應(yīng)過(guò)濾后使用或棄用。
2,、由于賴氏法的特點(diǎn),,在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)最好做 3 管的重復(fù)測(cè)定,求出各標(biāo)準(zhǔn)管的
吸光度均值,,減去“0"號(hào)管吸光度均值,,對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3,、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天,,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 個(gè)月,。
4,、成批樣本測(cè)定時(shí)一般無(wú)需每份樣本都做自身血清對(duì)照,以試劑空白管代替即可,。
5,、對(duì)于超過(guò)正常范圍的血清樣本,,應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè),復(fù)測(cè)時(shí)每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照,。
6,、嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清,,可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高,,因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)
做自身血清標(biāo)本對(duì)照。
7,、當(dāng)樣本的酶活力大于 150 卡門單位時(shí),,應(yīng)將樣本進(jìn)行 5~10 倍稀釋后再行測(cè)定。
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