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轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶,，氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)舊稱谷丙(GPT)主要存在于肝細胞漿

內(nèi)，細胞內(nèi)ALT濃度遠高于血清,，肝細胞破壞后血清ALT立即迅速升高,，因此谷ALT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的

檢測指標(biāo)。

氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測試劑盒(賴氏微板法)其檢測原理是ALT催化丙氨S與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng),，

二硝基苯肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的二硝基苯腙,，在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異，酶標(biāo)儀檢測在500~520nm處差

異最大,，以等摩爾濃度計算出的生成量,，進而計算酶的活性。100T該檢測試劑盒可檢測50個樣本(不含標(biāo)準品),，

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1,、蒸餾水

2,、離心管

3,、水浴鍋或恒溫箱

4、96 孔板,、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考)：

1,、準備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿,、血清按照常規(guī)方法制備,，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃

保存 1 個月有效,，用于 ALT/GPT 的檢測,。

②細胞或組織樣品：取恰當(dāng)細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清,，-20℃保存 1 個月有效,，

用于 ALT/GPT 的檢測。

③(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,，以便于后續(xù)計算單

位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的 ALT/GPT 含量,。

2、 制作 ALT 標(biāo)準曲線：取丙酮S標(biāo)準 1 支,，準確加入標(biāo)準稀釋液 1ml,，充分混勻,，

即配制成丙酮標(biāo)準(100mmol/L),，4℃保存?zhèn)溆谩ＥR用前,，按丙酮標(biāo)準(100mmol/L)：丙

酮S標(biāo)準稀釋液=1：49 的比例混合,，即為丙酮標(biāo)準工作液-丙酮標(biāo)準(2mmol/L)，以 96

孔板,，按下表制備標(biāo)準曲線,，最好設(shè)定平行檢測孔，求平均值,。

混勻,，向各管中加入苯肼顯色液 20ul，混勻,，37℃孵育 20min,，加入 ALT 顯色基液 200ul，

混勻,。室溫放置 5min,，以蒸餾水調(diào)零，酶標(biāo)儀 505nm 處讀取各管吸光度,。各管吸光度均減

去"0"號管吸光度,，所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖,。注意：

標(biāo)準品用分光光度計檢測參考值在 0.3~0.9 之間，加入 ALT 顯色基液后其顏色依次為黃色至

棕紅色,，應(yīng)及時檢測,，隨著時間的延長其顏色會加深，由于檢測儀器,、操作手法等條件的不

同,，參考值范圍會有波動。

3,、 ALT 加樣：按照下表設(shè)置對照孔,、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并注意避免產(chǎn)生

氣泡,。如果樣品中的 ALT 酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定,。

4,、 ALT 測定：混勻，室溫放置 5min,，以蒸餾水調(diào)零,，酶標(biāo)儀 505nm 處測定對照管、測定

管的吸光度(即為 A 對照,、A 測定),，如無 505nm 可選擇 500~520nm。

計算：以系列標(biāo)準孔活力卡門單位為橫坐標(biāo),，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),，繪制標(biāo)準曲線，以

(A 測定－A 對照)之差值,，從標(biāo)準曲線查得 ALT 活力卡門單位

參考范圍：成年健康人血清 ALT：5~25 卡門單位/ml

注意事項：

1,、苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出,，應(yīng)過濾后使用或棄用,。

2、由于賴氏法的特點,，在繪制標(biāo)準曲線時每個點最好做 3 管的重復(fù)測定,，求出各標(biāo)準管的

吸光度均值，減去“0"號管吸光度均值,，對照賴氏單位繪制標(biāo)準曲線,。

3、血清中 ALT 活性在室溫可以保存 2 天,，4℃保存 1 周,，-20℃保存 1 個月,。

4、成批樣本測定時一般無需每份樣本都做自身血清對照,，以試劑空白管代替即可,。

5、對于超過正常范圍的血清樣本,，應(yīng)該進行復(fù)測,，復(fù)測時每份樣本都應(yīng)做自身血清對照。

6,、嚴重黃疸,、脂血或溶血的血清，可能會引起測定管吸光度增高,，因此檢測該類樣本時應(yīng)

做自身血清標(biāo)本對照,。

7、當(dāng)樣本的酶活力大于 150 卡門單位時,，應(yīng)將樣本進行 5~10 倍稀釋后再行測定,。

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