目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測試劑盒>> TE0007(ALP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉比色法)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | TE0007 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,,廣泛分布于哺乳動物組織內,其活性所需最適pH 9.2~9
.8,。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜),,如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛,、肝的毛細膽管膜以及
微動脈和毛細血管動脈部之內皮,,還見于內質網(wǎng)、高爾基復合體,、吞飲小泡,、腸上皮之溶酶體,、中性粒細胞之中性顆粒以及
平滑肌的細胞膜。
(ALP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法,,其檢測原理是
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物,,在酸性條件下,可在堿性磷酸酶的作用下生成
p-nitrophenol,;在堿性條件下p-nitrophenol轉變成醌式結構,,呈較深的黃色,產(chǎn)物黃色越深說明堿性磷酸酶活性越高,,
反之則酶活性越低,,通過比色法(酶標儀)測定400~415nm處吸光度,據(jù)此通過比色分析就可以計算出堿性磷酸酶活性水平
,,可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液,、血漿、血清,、尿液等樣品中內源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研領域
,,不適用于臨床診斷或其他用途,。
操作步驟(僅供參考):
1、取內徑為8mm的玻璃試管2支,,分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。
2、靜脈采血1ml,,立即取下針頭,,沿管壁向各試管注入血液0.5ml,,立即混勻并啟動秒表計時,,并置于37℃水浴中,。
3,、每隔10s輕搖試管一次,,觀察管內血液流動情況,,直至血液凝固,。記錄血液凝固所需時間,,即為ACT,。
4,、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。
計算:參考區(qū)間: (1.77±0.76)min
4,、配制標準品工作液︰如果檢測血清,、尿液等樣品,按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1:99的比例配制,,使?jié)舛冗_到60μg/ml,,如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,,使?jié)舛冗_到60μg/ml。
注意事項:
1,、實驗材料應盡量新鮮,,如取材后不立即使用,應存于-20°C.
2,、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳,,可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,并蓋緊口,。
3,、TA滴定液為堿性溶液,有腐蝕性,,請小心操作,。
4、TA標定液容易長菌,,宜4℃保存,,一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。
5,、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用,,可考慮用0.01~0.05M TA滴定液進行滴定。
6,、TA滴定液含量計算公式中,,V0最好為3次空白測定的平均值。
7,、如果所測樣品的濃度過高,,應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。
8,、如果樣品顏色較深,滴定終點不易觀察,,應采用電位滴定法,。
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