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堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9

.8,。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛,、肝的毛細(xì)膽管膜以及

微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮,，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體,、吞飲小泡,、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及

平滑肌的細(xì)胞膜,。

堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法,，其檢測原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下,，可在堿性磷酸酶的作用下生成

p-nitrophenol,；在堿性條件下p-nitrophenol轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu),，呈較深的黃色，產(chǎn)物黃色越深說明堿性磷酸酶活性越高,，

反之則酶活性越低,，通過比色法(酶標(biāo)儀)測定400～415nm處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計(jì)算出堿性磷酸酶活性水平

,，可用于檢測細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液,、血漿、血清,、尿液等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域

，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

1,、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。

2,、靜脈采血1ml，立即取下針頭,，沿管壁向各試管注入血液0.5ml,，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中,。

3,、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況,，直至血液凝固,。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT,。

4,、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4,、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清,、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制,，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,，如取材后不立即使用,，應(yīng)存于-20°C.

2,、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,，并蓋緊口,。

3、TA滴定液為堿性溶液,，有腐蝕性,，請小心操作。

4,、TA標(biāo)定液容易長菌,，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用,。

5,、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定,。

6,、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值,。

7,、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,，并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。

8、如果樣品顏色較深,，滴定終點(diǎn)不易觀察,，應(yīng)采用電位滴定法。

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