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(Cholesterol)又稱膽甾醇,，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，廣泛存在于動物體內(nèi),，其中腦,、神經(jīng)組織，在腎,、脾,、皮膚,、

肝和膽汁中含量也較高,，用酶學方法測定總(Total Cholesterol，TC)是生化檢測中的常用方法,，其特點是：

1,、靈敏度、準確度,、精密度均高,；2、使用溫和的反應條件,；3,、操作簡便；4,、適用于自動分析儀,。

(YS)檢測試劑盒(COD-PAP雙試劑比色法)又稱氧化酶法或氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，血液中的約1/3為游

2/3為與脂肪酸結(jié)合的酯,，后者被酯酶(CEH)水解為游離,，游離被氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮，并產(chǎn)生過氧化氫,，

再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化,，使4-氨基安替(三者合稱PAP)反應，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應),，

分光光度計在500~520nm處進行比色測定,，用于人或動物的血清、血漿,、腦脊液,、細胞、組織等樣本中的總含量定量測定,。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支,，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。

2、靜脈采血1ml,，立即取下針頭,，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時,，并置于37℃水浴中,。

3、每隔10s輕搖試管一次,，觀察管內(nèi)血液流動情況,，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間,，即為ACT,。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值,。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4,、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品,，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制,，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,，使?jié)舛冗_到60μg/ml,。

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮,，如取材后不立即使用,，應存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳,，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,，并蓋緊口。

3,、TA滴定液為堿性溶液,，有腐蝕性，請小心操作,。

4,、TA標定液容易長菌，宜4℃保存,，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用,。

5,、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定,。

6,、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值,。

7,、如果所測樣品的濃度過高，應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,，并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。

8、如果樣品顏色較深,，滴定終點不易觀察,，應采用電位滴定法。

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