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(Cholesterol)又稱膽甾醇,，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物,，廣泛存在于動物體內(nèi)，其中腦,、神經(jīng)組織,，在腎、脾,、皮膚,、

肝和膽汁中含量也較高，用酶學(xué)方法測定總(Total Cholesterol,，TC)是生化檢測中的常用方法,，其特點(diǎn)是：

1,、靈敏度、準(zhǔn)確度,、精密度均高,；2、使用溫和的反應(yīng)條件,；3,、操作簡便；4,、適用于自動分析儀,。

(YS)檢測試劑盒(COD-PAP單試劑微板法)又稱氧化酶法或氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，血液中的約1/3為游

2/3為與脂肪酸結(jié)合的酯,，后者被酯酶(CEH)水解為游離,，游離被氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮，并產(chǎn)生過氧化氫,，

再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替(三者合稱PAP)反應(yīng),，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng)),，

分光光度計(jì)在500~520nm處進(jìn)行比色測定，用于人或動物的血清,、血漿,、腦脊液、細(xì)胞,、組織等樣本中的總含量定量測定,。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

1,、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。

2,、靜脈采血1ml，立即取下針頭,，沿管壁向各試管注入血液0.5ml,，立即混勻并啟動秒表計(jì)時，并置于37℃水浴中,。

3,、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況,，直至血液凝固,。記錄血液凝固所需時間,，即為ACT。

4,、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值,。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清,、尿液等樣品,，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1,、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2,、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳,，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口,。

3,、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性,，請小心操作,。

4、TA標(biāo)定液容易長菌,，宜4℃保存,，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5,、果實(shí)中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用,，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6,、TA滴定液含量計(jì)算公式中,，V0最好為3次空白測定的平均值。

7,、如果所測樣品的濃度過高,，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。

8,、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法,。

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