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銅是人體重要的微量元素,，是酶的重要組成部分如銅藍(lán)蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶,、細(xì)胞色素氧化酶等,，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結(jié)合,，形成銅藍(lán)蛋白,；5~10%的銅與清蛋白結(jié)合,，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測方法有分光光度計(jì),、原子吸收光譜法,、中子活化分析法等。          

銅檢測試劑盒(Cuprizone比色法)原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結(jié)合的銅從白蛋白中解離出來,，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與Cuprizone絡(luò)合,，形成穩(wěn)定的藍(lán)色絡(luò)合物，通過酶標(biāo)儀測定620nm處吸光度,，形成的藍(lán)色與血清,、血漿銅成線性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品比較,，根據(jù)公式計(jì)算出銅含量,，該檢測試劑盒在62.8μmol/L以下線性關(guān)系良好，特異性高,，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支,，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。

2、靜脈采血1ml,，立即取下針頭,，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí),，并置于37℃水浴中,。

3、每隔10s輕搖試管一次,，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況,，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間,，即為ACT,。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值,。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4,、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品,，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制,，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,。

注意事項(xiàng):

1,、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用,，應(yīng)存于-20°C.

2,、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,，并蓋緊口,。

3、TA滴定液為堿性溶液,，有腐蝕性,，請(qǐng)小心操作。

4,、TA標(biāo)定液容易長菌,，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用,。

5,、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定,。

6,、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值,。

7,、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定,，并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。

8、如果樣品顏色較深,，滴定終點(diǎn)不易觀察,，應(yīng)采用電位滴定法。

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