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血清中的無機(jī)磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-兩種磷酸根陰離子組成，上述陰離子在在不同的pH環(huán)

境下能快速相互轉(zhuǎn)換,。在pH7.4血清中兩種磷酸根陰離子濃度比例為1:4,；在酸中毒環(huán)境下二者濃度約為1:1；在堿中毒環(huán)

境下二者濃度比例為1:9,；在pH4.5尿液中濃度比例為100:1,。WHO推薦的常規(guī)檢測方法為比色法，我國衛(wèi)生部臨檢中心

推薦的常規(guī)方法為鉬藍(lán)比色法和米吐爾鉬藍(lán)比色法,。

無機(jī)磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍(lán)微板法)是先經(jīng)提純蛋白,，利用無機(jī)磷與鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸銨，

后者被還原成藍(lán)紫色的復(fù)合物,，通過酶標(biāo)儀檢測640nm處吸光度,，根據(jù)公式計算出無機(jī)磷含量。本試劑盒僅用

于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支,，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml,。

2、靜脈采血1ml,，立即取下針頭,，沿管壁向各試管注入血液0.5ml,，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中,。

3,、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況,，直至血液凝固,。記錄血液凝固所需時間，即為ACT,。

4,、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4,、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清,、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制,，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml,。

注意事項:

1,、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用,，應(yīng)存于-20°C.

2,、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水,，并蓋緊口,。

3、TA滴定液為堿性溶液,，有腐蝕性,，請小心操作。

4,、TA標(biāo)定液容易長菌,，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用,。

5,、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定,。

6,、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值,。

7,、如果所測樣品的濃度過高,，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式,。

8,、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察,，應(yīng)采用電位滴定法,。

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