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高鐵血紅蛋白還原檢測試劑盒(比色法),，是參與整個生物體基本代謝的中間產(chǎn)物之一，可通過三羧酸循環(huán)實現(xiàn)體內(nèi)糖,、脂肪和氨基酸間的互相轉(zhuǎn)化,，

丙酮酸在三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝聯(lián)系中起著重要的樞紐作用。丙酮酸是糖無氧代謝的產(chǎn)物,，科研工作者常將丙酮酸和乳酸一

起研究,，并用二者的比值推算循環(huán)衰竭的程度。丙酮酸檢測可采用乳酸脫氫酶催化法或二硝基苯肼比色法,。

雅吉生物丙酮酸檢測試劑盒(二硝基苯肼微板法)檢測原理是在酸性條件下,丙酮酸與二硝基苯肼反應,，

生成丙酮酸-二硝基苯腙復合物，后者經(jīng)氧化呈棕紅色,，通過酶標儀測定520nm處吸光度,，據(jù)此通過與標準曲線對比可以

計算出PA水平。該試劑盒可用于檢測植物,、細胞或組織,、血清等樣品中內(nèi)源性的丙酮酸含量,尤其適用植物樣品丙酮酸含量

的檢測。該試劑盒僅用于科研領域,，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

三、自備材料：

1,、離心管或小試管

2,、蒸餾水

3、酶標儀,、96孔板

四,、操作步驟(僅供參考)：

1、配制組織勻漿液(1×)∶取10ml組織勻漿液(3×)加入20ml蒸餾水即成,。

2,、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸餾水即成。

3,、準備樣品︰

①血清,、尿液及其他體液樣品:血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定,，-20°C凍存,。

②組織樣品︰稱取1g組織樣品置于勻漿器中，再加入1ml組織勻漿液(1x)仔細研磨,，振搖提取靜置30min ,取上清液4000rpm離心10min ,取上清液,用組織勻漿液(1×)定容至2ml , -20℃凍存,，用于PA的檢測。

③植物材料︰稱取1g植物材料置于勻漿器中，再加入1ml組織勻漿液(1×)仔細研磨,，振搖提取,靜置30min ,取上清液4000rpm離心10min ,取上清液,用組織勻漿液(1×)定容至2ml , -20℃凍存,，用于PA的檢測。

④高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的PA,，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，如雞血清可稀釋5～10倍后檢測,。

4,、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品,，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制,，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制,，使?jié)舛冗_到60μg/ml,。

六、注意事項：

1,、 實驗材料應盡量新鮮,，如取材后不立即使用，應存于 4℃,。

2,、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會干擾測定結(jié)果,，可在加入羥胺溶液 25℃水浴孵育20min 后用等體積3,、 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定,，但應考慮最小檢測體積,。

4、 所測樣本的濃度過高,，應用 O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測定,。

5、 氨基苯磺酸顯色液和萘胺顯色液有強烈的刺激性,，盡量在通風條件好的地方操作,，用后需擰緊瓶蓋，避免揮發(fā),。

七,、有效期：6 個月有效。4℃運輸,，4℃保存,。

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