目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>ATCC細胞>>ATCC原裝細胞系>> YS1123CPMVEC大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞ATCC
| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25瓶/2冷凍管 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | YS1123C | 主要用途 | 科研實驗 |
細胞名稱：PMVEC大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞ATCC
細胞代次：P4
細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）
細胞凍存：無血清凍存液
細胞傳代：第一次建議1:2
細胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法,。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認收到狀態(tài)良好,。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,，以便進行對比培養(yǎng)）
培養(yǎng)前的工作準備充分
包括耗材的處理、試劑的配置,，無菌檢驗等等,。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子,、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈,。用酸液浸泡 24 h 以上,，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液,。瓶子之類,，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎,，160℃ 干烤 2 h 待用。
試劑配置,。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可,。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。
無菌檢驗,。主要采用過濾除菌：如抗生素,、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉等,。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS,、D-Hank's等,。
試劑分裝保存
包括營養(yǎng)液、血清等,。
血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶,，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,，甚至置青m素瓶保存,。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾,。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清,。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。
熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已解凍之血清,。水浴鍋升到 56℃后,，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時,，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次,。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,，一般不要作此熱處理,，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì),。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。
注意事項：有些細胞比較特殊,，如貼壁不牢,，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min,，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打,，重懸,，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應,。再離心,，棄上清,，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25）,，補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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