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細胞名稱：ProPakA.6人胚腎細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法,。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,，前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準備充分

包括耗材的處理,、試劑的配置,，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗,。對于玻璃器皿（細胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角）,，然后沖干凈,。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍,，除去殘留酸液,。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃,。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎,，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置,。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可,。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗,。主要采用過濾除菌：如抗生素,、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉等,。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS,、D-Hank's等,。

試劑分裝保存

包括營養(yǎng)液、血清等,。

血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶,，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌,，不需再無菌過濾,。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,，勿直接過濾血清,。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃,，30 分鐘加熱已解凍之血清,。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入,，待溫度升高到 56℃ 后計時,，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,，一般不要作此熱處理,，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì),。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響,。

注意事項：有些細胞比較特殊,，如貼壁不牢,，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min,，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打,，重懸,，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應,。再離心,，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25）,，補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

YS929CNCI-H1650[H-1650人肺支氣管癌細胞

YS930CNCI-H1975[H-1975人肺腺癌細胞

YS931C(淋巴結轉(zhuǎn)移)NCI-H292人肺癌細胞

YS932CNCI-H441[H441]人肺腺癌細胞

YS933CNCI-H508人結腸直腸腺癌細胞

YS934CNCI-H661[h661]肺癌細胞人大細胞

YS935CNCI-H716[716]人結腸癌細胞

YS936COV-90人卵巢癌細胞

YS937COVCAR-3人卵巢腺癌細胞

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YS940CPANC10.05人胰腺癌細胞

YS941CPATU8988t人胰腺癌細胞

YS942C人前列腺癌PC-3

YS943CPL45人胰腺導管腺癌細胞

YS944CProPakA.6人胚腎細胞

YS945CQSG-7701人正常肝細胞

YS946CRaji人淋巴瘤細胞

YS947CRD人橫紋肌肉瘤細胞

YS948CREH白血病細胞人急性非B非T淋巴細胞

YS949CRWPE-2人前列腺正常細胞

YS950C肺癌SBC-2人小細胞

YS951C熒光標記SK-MEL-2+LUC人皮膚黑色素瘤細胞

YS952CSK-N-MC人神經(jīng)上皮瘤細胞

YS953C人腦膠質(zhì)瘤SNB-19

YS954CSV-HUC-1人膀胱上皮細胞

YS955CSW982[SW-982人滑膜肉瘤細胞

YS956CSW579人甲狀腺癌細胞

YS957CSW620人結直腸腺癌細胞

YS958C瘤T98G人膠質(zhì)母細胞

YS959CTF-1人紅白血病細胞

YS960CTT人甲狀腺癌細胞

YS961CTU686人喉癌細胞

YS962CU20S人成骨肉瘤細胞

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