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細(xì)胞名稱：NCI-H460人肺癌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法,。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,，前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分

包括耗材的處理,、試劑的配置,，無菌檢驗(yàn)等等。

玻璃器皿的清洗,。對于玻璃器皿（細(xì)胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角）,，然后沖干凈,。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍,，除去殘留酸液,。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃,。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用,。

試劑配置,。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié),。

無菌檢驗(yàn),。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液,、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌,，如 PBS,、D-Hank's等,。

試劑分裝保存

包括營養(yǎng)液、血清等,。

血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃,，如果一次無法用完一瓶,，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存,。一般廠商提供的血清為無菌,，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。

熱滅活是指 56℃,，30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后,，將血清放入,，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次,。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化,。除非必須，一般不要作此熱處理,，因?yàn)闀斐沙恋砦镏@著增多,，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對細(xì)胞的影響,。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊,，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,，1000rpm離心5min,，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打,，重懸,，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng),。再離心,，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25）,，補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

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