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細(xì)胞名稱(chēng)：MC3T3-E1Subclone24小鼠胚胎成骨細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分

包括耗材的處理,、試劑的配置，無(wú)菌檢驗(yàn)等等,。

玻璃器皿的清洗,。對(duì)于玻璃器皿（細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子,、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角）,，然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,，之后用清水沖洗 10 遍,，除去殘留酸液。瓶子之類(lèi)，沖洗過(guò)程要使勁搖晃,。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎,，160℃ 干烤 2 h 待用,。

試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可,。并注意 pH 值的調(diào)節(jié),。

無(wú)菌檢驗(yàn)。主要采用過(guò)濾除菌：如抗生素,、G-418 溶液,、各類(lèi)培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等,。有些可以采用高壓滅菌,，如 PBS、D-Hank's等,。

試劑分裝保存包括營(yíng)養(yǎng)液,、血清等。

血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃,，如果一次無(wú)法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無(wú)菌酸處理瓶中,，甚至置青m素瓶保存,。一般廠商提供的血清為無(wú)菌，不需再無(wú)菌過(guò)濾,。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾，勿直接過(guò)濾血清,。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢,，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,，這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,，1000rpm離心5min,，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml,，輕輕吹打,，重懸，消化1-2分鐘后,，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng),。再離心，棄上清,，加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

售后服務(wù)告知書(shū)

1）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā),；

2. 細(xì)胞污染問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，核實(shí)后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

5. 細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，核實(shí)后予重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照,，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

1. 客戶(hù)造成細(xì)胞污染,，不重發(fā),；

2. 客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

3. 非本庫(kù)推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定。

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YS679CMDA-MB-436人乳腺癌細(xì)胞

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