日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

細(xì)胞名稱：LLCLL/2小鼠肺癌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的最好辦法,。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,，將細(xì)胞瓶放入37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,，前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好,。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,，以便進(jìn)行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細(xì)胞傳代：如果未超過80%匯合度時,，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基,，放入37℃,、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),，傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代：

A1、對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2,、懸浮細(xì)胞凍存：

1,、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min,；

2,、棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001）,，混勻后加入凍存管中,。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3,、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可,；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上,。

B1,、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,，使之脫落后吸出,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25瓶）,，補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入到37℃,、5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2,、貼壁細(xì)胞凍存：

1,、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min,；

3,、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001）,，混勻后加入凍存管中,。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具）,，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；

2,、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3,、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,，接種至T25培養(yǎng)瓶,，放于37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4,、第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊,，如貼壁不牢,，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml,，輕輕吹打，重懸,，消化1-2分鐘后,，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,，棄上清,，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25）,，補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS583CF9/小鼠胚胎癌細(xì)胞小鼠畸胎瘤細(xì)胞

YS584CFRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞

YS585C瘤H-4-II-E[H4-II-E]大鼠肝細(xì)胞

YS586CHBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞

YS587CHCCC-9810型肝癌細(xì)胞人膽管細(xì)胞

YS588CHCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞

YS589CHCT-15人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

YS590CHCT-8[HRT-18]人回盲腸癌細(xì)胞

YS591CHEp-2人喉表皮樣癌細(xì)胞

YS593C（未分化）HGC-27人胃癌細(xì)胞

YS594CHL-60白血病細(xì)胞人原髓細(xì)胞

YS595CHL-7702[L-02人正常肝細(xì)胞

YS596CHT-1080[HT1080]人纖維肉瘤細(xì)胞

YS597CHUV-EC-C[HUVEC]人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS598CIBRS-2[IB-RS-2]豬腎細(xì)胞

YS599CJEG-3人絨毛膜癌細(xì)胞

YS600CJeKo-1淋巴瘤細(xì)胞人套細(xì)胞

YS601CJurkat白血病細(xì)胞人T淋巴細(xì)胞

YS602CK-562[K562]人慢性髓原白血病細(xì)胞

YS603CKB人口腔表皮樣癌細(xì)胞

YS604CKG-1人急性骨髓性白血病細(xì)胞

YS605CL6大鼠成肌細(xì)胞

YS606CNCTCclone929[Lcell小鼠成纖維細(xì)胞

YS607CLLC[LL/2小鼠肺癌細(xì)胞

YS608CLS174T[LS174T]人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

YS609CMCF7[MCF-7]人乳腺癌細(xì)胞

YS610CMDA-MB-435S/人黑素瘤細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞

YS611CMDBK[NBL-1]牛腎細(xì)胞

YS612CMDCK[NBL-2]犬腎細(xì)胞

YS613CMGC80-3[MGC-803]人胃癌細(xì)胞

YS614CMLTC-1瘤細(xì)胞小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞

YS615CMS1小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞

YS616CNAMALWA人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞

更多細(xì)胞歡迎咨詢我們：LLCLL/2小鼠肺癌細(xì)胞ATCC