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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)Elisa試劑盒
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被adropin（AD）抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的adropin（AD）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度。
樣品收集,、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。
3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。
5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.   試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.   實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

3.   濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。

4.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、25,、50,、100、200,、400 pg/mL
試劑的準(zhǔn)備
 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。

2.   自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.   樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。 

4.   除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.   棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.   每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.   每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

結(jié)果判斷
 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel工作表中,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。

2.  靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。

4.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。