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PCR產(chǎn)物反應(yīng)污染有哪些因素

閱讀:242      發(fā)布時間:2025-2-26
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1,、標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,,或標(biāo)本放置時,由于密封不嚴(yán)溢于容器外,,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中,,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導(dǎo)致彼此間的污染,。

2,、PCR試劑的污染: 主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍,、容器,、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

3,、PCR擴增產(chǎn)物污染.這是PCR反應(yīng)中最主要的污染問題.因為PCR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml),,遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,,就可造成假陽就可形成假陽性,。

還有一種容易忽視,最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染,;在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,,在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染.據(jù)計算一個氣溶膠顆??珊?8000拷貝,,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。

4,、實驗室中克隆質(zhì)粒的污染:在分子生物學(xué)實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室,,這個問題也比較常見.因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,,而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒,,由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力.其污染可能性也很大。

污染的監(jiān)測:一個好的實驗室,,要時刻注意污染的監(jiān)測,,考慮有無污染是什么原因造成的污染,以 便采取措施,,防止和消除污染,。


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