人前列腺癌細(xì)胞LNCaP Clone FGC,，是1977年從一位50歲白人男性（血型B+）的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離的,，當(dāng)時(shí)該患者已確診為轉(zhuǎn)移性前列腺癌。根據(jù)報(bào)道,，該細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮（生長(zhǎng)調(diào)節(jié)并生成酸性磷酸酶ACP）有響應(yīng),。
01,該細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落,；
02,該細(xì)胞會(huì)使培養(yǎng)基快速變酸,，且生長(zhǎng)緩慢，故傳代后 48 小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng),；
03,普通TC處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細(xì)胞很好的貼壁,，培養(yǎng)難度較高，需使用 Corning 的 cellbind 細(xì)胞培養(yǎng)瓶（貨號(hào)是 3289）,，或者使用多聚-L-賴(lài)氨酸溶液（貨號(hào) PB180523）包被過(guò)的培養(yǎng)皿,；
04,在細(xì)胞運(yùn)輸途中，多數(shù)細(xì)胞會(huì)從培養(yǎng)瓶底分離,，大片懸浮在培養(yǎng)基中,，按照收貨注意事項(xiàng)處理即可恢復(fù)正常。
收貨處理方式
收貨后,，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漂浮或成團(tuán),，可按下面的步驟進(jìn)行處理：
01,將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的所有培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm 3min）,；
02,去掉上清,，用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中,，PBS震動(dòng)離心管混勻即可,，再次離心（1200rpm 3min）；
03,去掉上清,，加入1ml左右0.25%胰酶，重懸混勻細(xì)胞,。震動(dòng)離心管,，混勻即可，不能吹打,。放入培養(yǎng)箱,，消化細(xì)胞，消化時(shí)間3分鐘左右,；
04,消化完畢后,，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散,。加入5ml含血清的培養(yǎng)基,，混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）,；
05,去掉上清,，加入5-7ml相應(yīng)培養(yǎng)基混勻，輕輕/反復(fù)吹打細(xì)胞,，接種于無(wú)菌T25瓶中（接種容器應(yīng)提前用對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基浸潤(rùn)）,。
▲ 細(xì)胞到貨漂浮
▲ 細(xì)胞接種量少
傳代步驟
01,吸出原培養(yǎng)液；
02,加入2ml左右PBS,，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶,，潤(rùn)洗細(xì)胞，吸出PBS,，丟棄,；
03,加入1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶,，使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞,；
04,放入培養(yǎng)箱消化，消化5分鐘左右,，顯微鏡下可看到,，細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓,，且自然脫落（全程不要拍打培養(yǎng)瓶）；
05,加入3ml含血清的培養(yǎng)基,，終止消化,，輕輕/反復(fù)吹打細(xì)胞，在顯微鏡下觀(guān)察,。細(xì)胞懸液中,，細(xì)胞盡量為單個(gè)狀態(tài)；
06,收集細(xì)胞懸液,，離心（1200rpm 3min）,。離心完，吸出上清,，丟棄,；
07,加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下,，混勻細(xì)胞即可,。按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充足量培養(yǎng)基,，擰松瓶蓋,，或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)；
08,檢查培養(yǎng)箱的二氧化碳,、溫度及水盤(pán),。
傳代比例和頻次
推薦1:2~1:4傳代，每4~5天傳代一次,。
換液步驟
吸出舊培養(yǎng)基,，沿培養(yǎng)瓶側(cè)邊加入新培養(yǎng)基；
每3天換液一次,。
凍存步驟
01,配置凍存液,。推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基1640）+40%(血清)+5%（DMSO）；
02,DMSO配置時(shí)會(huì)放熱,，一定要等凍存液冷卻后再使用,，避免灼傷細(xì)胞；
03,細(xì)胞消化好后用新鮮培養(yǎng)基中止,，制成細(xì)胞懸液,；
04,1200rpm 3min 離心后去上清，盡量吸干凈上清,；
05,加入配置好的凍存液,，重懸，建議一個(gè)T25長(zhǎng)滿(mǎn)凍存1支，或者細(xì)胞計(jì)數(shù)后,，按照2-5×106cells/支的比例凍存,；
06,將分裝好的凍存液轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過(guò)夜,；
07,從-80℃冰箱取出凍存管,，迅速轉(zhuǎn)移到液氮，長(zhǎng)期保存,。
復(fù)蘇步驟
01,將水浴鍋預(yù)熱至37℃,，準(zhǔn)備好干凈的一次性手套，向一個(gè)無(wú)菌離心管內(nèi),，加入9ml無(wú)菌培養(yǎng)基,；
02,將細(xì)胞從液氮罐中取出，放入一次性手套中,，迅速?zèng)]入水浴鍋,。搖晃凍存管加速溶解，以1分鐘內(nèi)全部溶解為宜,；
03,在超凈臺(tái)中,，將復(fù)蘇好的細(xì)胞液,，加入到裝有新鮮培養(yǎng)基的離心管內(nèi),，1200rpm/min離心3分鐘，離心完畢,，去掉上清,；
04,用適量與細(xì)胞對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接入到無(wú)菌容器（培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿）中,，補(bǔ)充一定量培養(yǎng)基,，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
05,溶解過(guò)程要迅速,，已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久,，需盡快離心去除DMSO。
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