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DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)

一,、產(chǎn)品簡介：

在生命活動的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基而自由基的積累會使機體產(chǎn)生氧化損傷而引起衰老、腫瘤,、中風,、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在眾多自由基中2,，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一種較穩(wěn)定的自由基,，當有自由基清除劑存在時顏色由紫色向黃色轉(zhuǎn)變，吸光度隨之變小,。

雅吉生物 DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒,，其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，含一個單電子,，溶于乙醇后溶液呈紫色,，在517nm下有強吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個電子與此單電子配對,，溶液會褪色,，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過吸光度下降的程度來反應樣品的氮自由基清除能力,，主要用于檢測血清,、植物組織、抗氧化類食品,、保健品及藥品等樣本,。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

二,、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1,、蒸餾水,、無水乙醇

2、實驗材料∶植物組織(芹菜,、綠豆,、玉米等葉片)、血液,、組織樣本等

3,、研缽或勻漿器或粉碎機或超聲破碎機

4、離心機、離心管

5,、恒溫水浴鍋,、恒溫干燥箱

6、電子天平,、30~50目篩

7,、分光光度計、比色皿

四,、操作步驟(僅供參考)：

1,、準備樣品∶

①植物樣品∶取新鮮植物樣本，清洗干凈,，研缽研碎(粉碎),，干燥箱烘干后過篩，稱取0.05g 樣品,，加入0.8ml氮自由基提取液,，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min,，上清液待用,，4℃保存?zhèn)溆?亦可參考相關資料提取方法提取)。

②血漿,、血清和尿液樣品︰血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝,，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm離心10min，取上清液待用;血清或尿液樣品可直接測定,。

③細胞樣品︰按每5×10°個細胞加入0.8ml氮自由基提取液,，超聲破碎(功率200W,超聲3s，間隔10s,，重復30次),，10000rpm 離心10min，取上清液待用,。

④果汁,、葡萄酒等樣品︰按樣品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min,，上清液待用,，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

⑤高活性樣品︰如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2,、配制維生素C溶液︰將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中,，即成10mg/ml維生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存,。

3,、配制Vc標準工作液︰如需測線性關系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20,、15,、10、8,、6,、4、2μg/ml的Vc標準工作液;如需清除率約為100%的陽性對照,，建議選用大于 30μg/ml 的Vc標準工作液,。

4、分光光度計開機預熱 30min,，調(diào)節(jié)波長517nm(500~530nm亦可),，無水乙醇調(diào)零。

5,、DPPH加樣∶按照下表設置空白管,、樣本測定管、樣本對照管,、陽性對照管,，溶液應按照順序依次加入，混勻,，室溫避光靜置30min,。

6,、OD值測定∶將各管溶液依次加入到比色皿中,，用分光光度計檢測各管吸光度值,，依次記為A₀,、A₁、A₂,、A₃。

五、計算：

陽性對照·DPPH清除率(%)= (A₀- A₃)/A₀×100%

待測樣本·DPPH清除率(%)=[A₀-( A₁- A₂)]/A₀×100%

備注:

A₀=空白管的吸光度值

A₁=樣本測定管的吸光度值

A₂=樣本對照管的吸光度值

A₃=陽性對照管的吸光度值

六、注意事項：

1,、正式測定之前建議選擇2~3個預期差異較大的樣本做預實驗,。

2、實驗材料應盡量新鮮,，當天提取當天測定。

3,、不同樣本清除DPPH自由基的能力差異很大,。

4、如樣本DPPH清除率大于90%,，應用提取液稀釋,；如樣本 DPPH清除率小于5%，應提高樣本用量以提高有效成分濃度,。

5、樣品中不宜添加Triton,、DTT等可能影響氧化還原反應的成分。

6,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

七,、有效期：6 個月有效,。4℃運輸，4℃保存,。