細(xì)胞培養(yǎng)/細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟
一,、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的注意事項(xiàng)：
1,、確定所有的細(xì)胞操作用的溶液和耗材都已經(jīng)消毒并檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請(qǐng)勿使用,，除非特殊情況,，不要借
用別人的溶液。
2,、確定衣服的袖口已經(jīng)卷起或者白大褂的袖口已經(jīng)扎緊,。
3、確定酒精燈內(nèi)的酒精量,，需要的話及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充,。
4、確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置,。為了方便單手開啟瓶蓋,，實(shí)驗(yàn)開始前可以把所有瓶蓋旋松。
5,、盡量不要直接傾倒溶液,，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗,，溶液粘在瓶口,，請(qǐng)用噴過75%酒精的紙巾仔細(xì)清潔瓶口
周圍（不要接觸到瓶口）后在火焰上簡單燒灼。
6,、操作時(shí)如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,，必須及時(shí)更換。
7,、實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾,，保持工作區(qū)域清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺(tái)面,。
二,、細(xì)胞污染的預(yù)防
1,、實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑,、耗材,、器材的清洗、消毒,。各種溶液滅菌要仔細(xì),，并在無菌實(shí)驗(yàn)檢測陰性后才能
使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔,、消毒,、滅菌。
2,、操作過程防止污染,。
3、穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間,。
4,、實(shí)驗(yàn)開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品,，必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒,。
5、進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門,，坐下來盡量少走動(dòng)以免影響生物安全柜的風(fēng)簾,。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。
事先要嚴(yán)格檢查所用的器材,、溶液和細(xì)胞,，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用,，以免造成大規(guī)模污染,。
6、細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕,，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼,，注意不要讓火焰把塑料
瓶口燒化,。
7、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物安全柜的隔板要盡可能放低,，盡量減少談話,，打噴嚏或咳嗽時(shí)絕對(duì)不能對(duì)著工作區(qū)，以免造成不必要的
污染,。
8,、瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方,，以避免瓶蓋被誤操作所污染。
9,、不要從敞開的容器口上方經(jīng)過,，以避免衣服上掉落不明物體對(duì)細(xì)胞的污染。
10,、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)要注意及時(shí)更換巴斯德吸管,、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底,。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無法
確定潔凈的物品必須直接丟棄,。實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí)收拾，保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊,，最后用75%酒精清潔臺(tái)面,。
三、防止細(xì)胞交叉污染
1,、在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，最好作上標(biāo)記便于辨別,。按順序進(jìn)行操作,，一次只處理一種細(xì)胞，
多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂,。
2,、在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞,。
3、所有細(xì)胞一旦購置,，或從別處引入,，或自己建立，必須及時(shí)保種凍存,，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞,，繼續(xù)培養(yǎng)。
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