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重組腺病毒載體快速檢測試劑盒

一,、原理

重組腺病毒（rAdv）載體是目前用于基因傳遞,、體液和細(xì)胞免疫研究的載體之一,。包裝腺病毒以及腺病毒擴(kuò)增均需要進(jìn)行腺病毒復(fù)制效率的評價,，通常方法是 TCID50測定,、核酸雜交,、實時熒光定量 PCR,、SDS-PAGE 電泳等,。重組腺病毒六鄰體蛋白快速檢測卡提供了一種可以在實驗當(dāng)中對腺病毒載體進(jìn)行快速檢測的方法。其原理是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測,，其主要結(jié)構(gòu)由層析膜,、樣品墊、金標(biāo)墊,、吸水紙,、背板等組成。在層析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗體（質(zhì)控線）和腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體（檢測線）,；在金標(biāo)墊上固定有膠體金標(biāo)記的另外一株腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體,。當(dāng)待測樣品滴加到樣品墊時，通過毛細(xì)作用,，液體向金標(biāo)墊移動,。當(dāng)液體通過金標(biāo)墊時，樣品中含有的腺病毒即與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合,，形成病毒金標(biāo)抗體復(fù)合物,，當(dāng)復(fù)合物移動到檢測線時，被固定在檢測線上的腺病毒抗體所捕獲,。隨著被捕獲的復(fù)合物的堆積,，在檢測線上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。當(dāng)復(fù)合物移動到質(zhì)控線時,，羊抗鼠多抗捕獲膠體金標(biāo)記的鼠單克隆抗體,，在質(zhì)控線上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測線和質(zhì)控線是否顯色,，即可判斷樣品中是否存在重組腺病毒,。本檢測卡的檢測下限為108vp/ml，在108-1010vp/ml 的檢測范圍內(nèi),，隨腺病毒濃度提高,，檢測線條帶的顯色逐漸增強，腺病毒濃度與檢測線條帶強度呈現(xiàn)正相關(guān),。該檢測卡可以識別包括腺病毒3,、5、7,、11,、40、41型等多種亞型,。

重組腺病毒載體快速檢測試劑盒

二,、用途

5型重組腺病毒包裝或擴(kuò)增時的病毒滴度快速評估重組腺病毒載體效價評估方法有基于細(xì)胞病變的 TCID50測定、核酸雜交、實時熒光定量 PCR,、SDS-PAGE 電泳等,。這些方法均耗時耗力，并且成本高昂,。與上述方法相比,，腺病毒快速檢測卡使用簡便，檢測時間短,，可以隨時對轉(zhuǎn)染,、收毒、擴(kuò)增,、純化效果進(jìn)行評估,。如在更換培養(yǎng)基時，吸取樣品滴加到檢測卡上,，10~15min 后即可判讀結(jié)果,。因此，使用該快速檢測卡,，可以快速評估轉(zhuǎn)染效果,，減少不必要的時間和試劑浪費。

三,、組成

1）檢測卡,；2） 稀釋液； 3）說明書

四,、使用方法

1.打開包裝取出檢測卡,，平放在生物安全柜臺面上；

2.用微量移液器吸取 20μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清等,，滴加到樣品窗（S）中；再加入 50μl 緩沖液,；

3.室溫靜置10-15min后即可判讀結(jié)果,。

五、結(jié)果判斷

1.在檢測窗中,，質(zhì)控線（C）和檢測線（T）均顯色即為陽性,；

2.質(zhì)控線（C）顯色，檢測線（T）不顯色,，檢測結(jié)果為陰性,；

3.質(zhì)控線（C）不顯色，無論檢測線（T）是否顯色,，檢測無效,。