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產(chǎn)品貨號:KX0210049

產(chǎn)品名稱:新型乳劑(佐劑)

類別:免疫佐劑

注意事項:運輸保存：建議常溫運輸，2-8oC保存,，無菌取用,，有效期18 個月。（切勿凍存?。?/p>

產(chǎn)品描述:新型乳劑(佐劑)是一種具有自主知識產(chǎn)權(quán),、配方的新型油包水佐劑，用于免疫小鼠和家兔等實驗動物以制備單、多克隆抗體,。該佐劑以弗氏不佐劑為基礎(chǔ),，添加了多種具有強免疫刺激活性的 TLR 配體。該佐劑與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比,，具有（1）佐劑活性強于弗氏不佐劑,；（2）與弗氏佐劑不同，不含有干擾免疫應(yīng)答的無關(guān)蛋白成分,；（3）安全性好,，副反應(yīng)率低；（4）免疫針次少,、抗原用量低等多方面優(yōu)點,。

使用方法:

用生理鹽水將抗原稀釋到2倍最終濃度（按小鼠每針次50μl、家兔每針次100μl用量配制）,。備注：推薦使用的抗原用量為小鼠每針次10-20μg,、家兔每針次20-50μg。

乳化：無菌條件下取出所需用量（按小鼠每針次 50μl,、家兔每針次100μl）與抗原按體積比1:1混合乳化,，至形成白色油包水的乳濁液狀態(tài)（鑒定方法：滴一滴乳濁液在常溫水面上，若凝聚不散開或散開緩慢,，成滴狀浮于水面,，即乳化，為合格的油包水劑）,。乳化方式有以下幾種：

(1)機械Vortex法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中,，使用槍頭反復(fù)吹打混合后，放在旋渦混勻儀上劇烈振蕩乳化5-30min以上, 直至形成粘稠的乳劑為止,。備注：乳化過程中儀器會放熱,，因此可以將整個操作系統(tǒng)放置于4℃條件下進行。

(2)手動注射器混合法：

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中,，槍頭反復(fù)吹打混合,，隨后轉(zhuǎn)移至一個注射器內(nèi)，安裝針頭,，針管有助于乳液的形成,，用力上下抽吸，乳化30-60min以上,，直到形成穩(wěn)定的乳液,。備注：此操作過程中注意防脫針及個人安全。

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中,，槍頭反復(fù)吹打混合,，隨后轉(zhuǎn)移至一個注射器內(nèi),，利用三通閥等將其與另一個注射器連接，注意排凈空氣,，將抗原和佐劑在兩個注射器中交替推動,，乳化30-60min以上，直至形成粘稠的乳劑并很難推動為止,。備注：此操作過程中注意漏液,。

(3)機械攪拌法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中，將佐劑乳化器（貨號: BDYQ1001）攪拌頭置于混合液的中上部打開開關(guān),，然后用自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層,，慢慢下移，隨后根據(jù)乳化的程度,，可局部上下擺動前進,，最終達到溶液底部完成乳化。博奧龍佐劑乳化器能夠輕松解決佐劑與抗原的乳化過程,，一般1-10ml乳化量3-5min即可,，最多不超過10min,。

(4)研磨法：取適量佐劑放入無菌的研缽,，緩慢滴加等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨,，滴加抗原的速度要慢,。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時間,，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑,。注意：本方法適用于大量制備，缺點是研缽壁上易粘附大量乳劑,，抗原損失較大,。

(5)超聲法：使用配有小探頭的超聲波設(shè)備將抗原和佐劑的混合物進行超聲處理。超聲波的能量有助于打破抗原和佐劑的界面,，使其均勻乳化,。這種方法適用于一些難以乳化的樣品，但是要控制超聲頻率,、時間和溫度,，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害,。

通過皮下或肌肉單點注射免疫動物,，小鼠每針次100μl，家兔每針次200μl,。備注：（1）佐劑與抗原混合后應(yīng)盡快注射,，若放置時間較長出現(xiàn)水油相分層,，則必須按上述步驟 2重新混勻；（2）抽入針管前應(yīng)搖勻,，抽入針管后應(yīng)盡快注射,；（3）盡量選擇引流淋巴結(jié)附近（如腋窩和腹股溝附近）的皮下 或肌肉進行免疫。

第21天按同樣方式加強免疫1針,。備注：每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用,。

第35天采微量血進行ELISA測定，抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:10000000 范圍內(nèi),，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合,。

若抗體滴度沒有達到要求，可在第42天按同樣方式加強免疫1針,。備注：通常情況下小鼠只需免疫2針,，而家兔往往需要免疫3針。

若免疫3針,，可在第52-56天采微量血進行ELISA測定,，抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:1000000范圍內(nèi)，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合,。備注：佐劑免疫效果有時也與抗原特性有關(guān),， 若免疫3針后仍達不到要求，不建議進行更多針次免疫,。