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一,、簡介

His標(biāo)簽蛋白（競爭法）快速檢測試劑盒是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測試劑。主要結(jié)構(gòu)由樣品墊,、金標(biāo)墊,、層析膜、吸水紙,、背板等組成,。在層析膜上固定有金標(biāo)抗體的二抗（質(zhì)控線）和帶有His-tag的蛋白（檢測線）；在金標(biāo)墊上固定有膠體金標(biāo)記的抗His-Tag的單克隆抗體,。當(dāng)待測樣品滴加到樣品墊時,，通過毛細作用，液體向金標(biāo)墊移動,。當(dāng)不含有His-Tag蛋白的待測樣品通過金標(biāo)墊時,，His-Tag金標(biāo)抗體隨著層流移動到檢測線位置，與固定在檢測線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,，并在檢測線上形成酒紅色條帶,；當(dāng)含有His-Tag蛋白的待測樣品通過金標(biāo)墊時,，His-Tag金標(biāo)抗體與待測樣本中的His-Tag蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合，樣本中含有的His-Tag蛋白越多,，與之結(jié)合的金標(biāo)His-Tag抗體越多,，剩余的游離His-Tag金標(biāo)抗體越少，隨著層流移動到檢測線位置,，游離的His-Tag金標(biāo)抗體與固定在檢測線上的帶有His-tag的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,，并在檢測線上形成淡淡的酒紅色條帶或者不顯帶。當(dāng)復(fù)合物移動到質(zhì)控線時,，His-Tag金標(biāo)抗體被包被在質(zhì)控線的金標(biāo)抗體二抗所捕獲,，并在質(zhì)控線上形成酒紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測線和質(zhì)控線是否顯色及顯色的強弱,，判斷樣品中是否存在His-Tag蛋白,。本試劑檢測下限為10ug/mL，即當(dāng)待測樣品中His-Tag蛋白的濃度達到10ug/ml及以上濃度時,，檢測線的強度會被有效的削弱,，顯示出淡淡的酒紅色條帶或不顯色。當(dāng)檢測樣品中His-Tag蛋白濃度在10ug/mL至100ug/mL時,，檢測線顏色的深淺與樣品中His-Tag蛋白的濃度呈負相關(guān)。當(dāng)樣本中的His-Tag蛋白濃度達到100ug/ml以上時,，檢測線發(fā)生消線即無肉眼可見條帶出現(xiàn),。

二、His標(biāo)簽蛋白（競爭法）快速檢測試劑盒用途

原核表達系統(tǒng),、真核表達系統(tǒng)獲得的His-Tag蛋白產(chǎn)物,，均可以使用本檢測試劑進行快速檢測。

三,、組成

1）檢測卡,；2）稀釋液；3）說明書

四,、使用方法

1.將本試劑包裝打開,，將檢測卡平放在生物安全柜臺面上；

2.待測樣本的預(yù)稀釋：

若待測標(biāo)簽蛋白濃度已知,，則利用試劑配套的稀釋液直接稀釋樣本至30ug/ml,；

若待測標(biāo)簽蛋白濃度未知，則利用試劑配套的稀釋液對來源于細菌裂解液的待測樣本進行4倍稀釋,，渦旋震蕩混勻,；對于來源于哺乳細胞裂解液的待測樣本無需進行預(yù)稀釋；

3.用微量移液器吸取20μl待檢標(biāo)本,，滴加到樣品孔中,；

4.向樣品孔中滴加50μL樣品稀釋液（滴瓶垂直滴加2滴），10-15分鐘后即可判讀結(jié)果。

注：建議每次檢測都設(shè)置一個陰性對照檢測卡（陰性對照卡加入的樣本應(yīng)同待測樣本有相同的基質(zhì)組成,，并確定不含His-Tag蛋白）,，通過與陰性對照檢測卡檢測線顯色強弱的比對，可以更加直觀的得出實驗結(jié)論,。