轉(zhuǎn)染是將外源性核酸（DNA或RNA）采用各種化學(xué),、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入細胞,，從而實現(xiàn)對細胞基因功能的蛋白質(zhì)表達研究。生成重組蛋白,，或特異性地增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達是轉(zhuǎn)染實驗的主要目的,。因此，轉(zhuǎn)染是一種功能強大的分析工具,，可用于基因或基因產(chǎn)物的功能和調(diào)控研究,，用于生成轉(zhuǎn)基因生物，并可用作基因治療方法,。常規(guī)的轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，怎么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢？
選擇瞬時轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，具體取決于您要開展的實驗的時間范圍和最終目標(biāo),。瞬時轉(zhuǎn)染細胞一般在轉(zhuǎn)染后24-96小時收集，常用于研究基因或基因產(chǎn)物的短期表達效應(yīng),，執(zhí)行RNA干擾（RNAi）介導(dǎo)的基因沉默,，或快速生成小量重組蛋白,。相比之下,，當(dāng)需要長期基因表達或轉(zhuǎn)染細胞需在多項實驗中使用時，則更多地選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。由于將DNA載體整合至染色體中的概率較低,，細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染更麻煩、更具挑戰(zhàn)性,，需要選擇性篩選和克隆分離,。因此，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通常用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn),、長期藥理學(xué)研究,、基因治療或長期基因調(diào)控機制研究。
瞬時轉(zhuǎn)染 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 |
外源基因保留在細胞核內(nèi),，不整合到基因組中 | 外源基因整合到基因組中 |
外源基因不傳給子代,，遺傳改變是暫時的 | 外源基因代代相傳，遺傳改變是長久的 |
瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便選擇性篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆株 |
DNA,、RNA都可用于瞬轉(zhuǎn) | 只有 DNA可用于穩(wěn)轉(zhuǎn),，RNA 本身不能穩(wěn)定導(dǎo)入細胞 |
操作簡單，構(gòu)好質(zhì)粒經(jīng)細胞復(fù)蘇,、轉(zhuǎn)染,、細胞培養(yǎng),、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白 | 需先將構(gòu)好的質(zhì)粒線性化，再導(dǎo)入細胞,，經(jīng)過篩選,、細胞傳代等步驟才能得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系 |
周期短，快速產(chǎn)生高表達目的蛋白 | 周期長,，需要 2~3 周篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株,，蛋白表達水平低 |
無法長期生產(chǎn)得到重組蛋白 | 能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白 |
實驗成本低 | 實驗成本高，得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后再生產(chǎn)蛋白成本大大降低 |
本期內(nèi)容：怎么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢,？
下期內(nèi)容：ELISA實驗的具體步驟
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