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怎么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢?

閱讀:1428      發(fā)布時間:2023-11-9
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轉(zhuǎn)染是將外源性核酸(DNA或RNA)采用各種化學(xué),、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入細胞,,從而實現(xiàn)對細胞基因功能的蛋白質(zhì)表達研究。生成重組蛋白,,或特異性地增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達是轉(zhuǎn)染實驗的主要目的,。因此,轉(zhuǎn)染是一種功能強大的分析工具,,可用于基因或基因產(chǎn)物的功能和調(diào)控研究,,用于生成轉(zhuǎn)基因生物,并可用作基因治療方法,。常規(guī)的轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,,么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢?


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選擇瞬時轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,,具體取決于您要開展的實驗的時間范圍和最終目標(biāo),。瞬時轉(zhuǎn)染細胞一般在轉(zhuǎn)染后24-96小時收集,常用于研究基因或基因產(chǎn)物的短期表達效應(yīng),,執(zhí)行RNA干擾(RNAi)介導(dǎo)的基因沉默,,或快速生成小量重組蛋白,。相比之下,,當(dāng)需要長期基因表達或轉(zhuǎn)染細胞需在多項實驗中使用時,則更多地選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。由于將DNA載體整合至染色體中的概率較低,,細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染更麻煩、更具挑戰(zhàn)性,,需要選擇性篩選和克隆分離,。因此,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通常用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn),、長期藥理學(xué)研究,、基因治療或長期基因調(diào)控機制研究。

瞬時轉(zhuǎn)染

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

外源基因保留在細胞核內(nèi),,不整合到基因組中

外源基因整合到基因組中

外源基因不傳給子代,,遺傳改變是暫時的

外源基因代代相傳,遺傳改變是長久的

瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性

穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便選擇性篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆株

DNA,、RNA都可用于瞬轉(zhuǎn)

只有 DNA可用于穩(wěn)轉(zhuǎn),,RNA 本身不能穩(wěn)定導(dǎo)入細胞

操作簡單,構(gòu)好質(zhì)粒經(jīng)細胞復(fù)蘇,、轉(zhuǎn)染,、細胞培養(yǎng),、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白

需先將構(gòu)好的質(zhì)粒線性化,再導(dǎo)入細胞,,經(jīng)過篩選,、細胞傳代等步驟才能得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系

周期短,快速產(chǎn)生高表達目的蛋白

周期長,,需要 2~3 周篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株,,蛋白表達水平低

無法長期生產(chǎn)得到重組蛋白

能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白

實驗成本低

實驗成本高,得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后再生產(chǎn)蛋白成本大大降低





































本期內(nèi)容:么選擇瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢,?

下期內(nèi)容:ELISA實驗的具體步驟



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