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1．多管發(fā)酵法

初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)  

    發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,，并在內(nèi)倒置有小玻璃管。培養(yǎng)液中加入溴甲酚紫作為酸度指示劑,，細(xì)菌產(chǎn)酸后,，培養(yǎng)液即由原來(lái)的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽(yáng)性,，如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯,，可輕拍發(fā)酵管，有小氣泡升起為陽(yáng)性,。

復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)  

    輕微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)酵管,，用3mm接種環(huán)將培養(yǎng)物（2-3環(huán)）轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h（提高培養(yǎng)溫度可造成不利于來(lái)自自然環(huán)境的大腸菌群的生長(zhǎng)）,。培養(yǎng)后立即觀察,，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性,。

2．濾膜法

   濾膜是一種微孔性濾膜，孔徑0.45μm,。將水樣注入已滅菌的放有濾膜的過(guò)濾器中,，經(jīng)過(guò)抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上,，然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上,，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24 h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色,，其他非糞大腸菌群菌落成灰色,、淡黃色或無(wú)色。正常情況下,，由于溫度和玫瑰酸鹽試劑的選擇性作用,，在M-FC培養(yǎng)基上很少見(jiàn)到非糞大腸菌菌落。

二．兩種方法的注意事項(xiàng)

1．培養(yǎng)溫度的要求  

   總大腸菌群中的細(xì)菌除生活在腸道中外,，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在,，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養(yǎng)的zui合適溫度為25℃左右，如在37℃培養(yǎng)則仍可生長(zhǎng),，但如將培養(yǎng)溫度再升高至44．5℃,，則不再生長(zhǎng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細(xì)菌,，習(xí)慣于37℃左右生長(zhǎng),，如將培養(yǎng)溫度升高至44．5℃仍可繼續(xù)生長(zhǎng)。因此,，可用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分,，兩種方法也都基于此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培養(yǎng)基放入生化培養(yǎng)箱時(shí),，箱內(nèi)溫度一定要達(dá)到所要求的溫度（44.5±0.5℃）時(shí),，方可放入。如用恒溫水浴箱時(shí),，其水面要高于接種物面,，放濾膜的培養(yǎng)皿要沉到水浴箱底部。

2．加氯水樣的處理 

   經(jīng)氯處理消毒過(guò)的水樣,，水中含有一定量的余氯,，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài)，在采集水樣時(shí)應(yīng)提前在采樣瓶中加硫代硫酸鈉,，硫代硫酸鈉可以脫氯,，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修復(fù)，從而避免出現(xiàn)計(jì)數(shù)結(jié)果偏低甚至假陰性的現(xiàn)象。此外余氯對(duì)濾膜法培養(yǎng)的細(xì)菌其抑制作用尤為明顯,，所以抽濾時(shí)應(yīng)對(duì)水樣進(jìn)行大量無(wú)菌水稀釋,，以減少余氯的殘留。

3．樣品的保存  

   采樣用的容器使用前應(yīng)蓋好瓶蓋,，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好,，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min,。采樣后水樣的正確保存也很重要,，如保存不當(dāng)可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌死亡或在一定條件下再生長(zhǎng),，這些都將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。檢測(cè)室接到水樣后，應(yīng)立即檢測(cè),，如因故不能檢測(cè)時(shí),，應(yīng)立即將樣品置于冰箱內(nèi)（2℃-10℃）并于2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。

4．培養(yǎng)物質(zhì)的制備與保存

  ⑴多管發(fā)酵法所使用的培養(yǎng)液在分裝于各發(fā)酵管中后,，應(yīng)將發(fā)酵管盡快放于高壓蒸汽滅菌器中,，在115℃滅菌20min（注意：這個(gè)溫度也應(yīng)控制好，既達(dá)到滅菌的作用,，還要防止培養(yǎng)物質(zhì)分解流失）,，然后貯存于冰箱或暗處備用。

    ⑵濾膜法所采用的M-FC培養(yǎng)基多使用外購(gòu)的成品,，培養(yǎng)基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的顏色,，因此，無(wú)菌包裝的成套培養(yǎng)基在使用前,，先接種典型糞大腸菌,，以觀察對(duì)比菌落的顏色，來(lái)鑒定其穩(wěn)定性,。

    Binder生化培養(yǎng)箱具有計(jì)時(shí)器功能,，Binder生化培養(yǎng)箱KB系列強(qiáng)制對(duì)流微生物低溫培養(yǎng)箱，生化培養(yǎng)箱適用于在廣闊溫度范圍內(nèi)的復(fù)雜用途,，生化培養(yǎng)箱也可以在交叉溫度的場(chǎng)合,，Binder KB系列生化培養(yǎng)箱是采用APT.line?內(nèi)腔預(yù)熱技術(shù)的生化培養(yǎng)箱，生化培養(yǎng)箱---KB系列生化培養(yǎng)箱又稱微生物低溫培養(yǎng)箱,，生化培養(yǎng)箱是強(qiáng)制對(duì)流的低溫生化培養(yǎng)箱,，生化培養(yǎng)箱適用于廣闊溫度范圍內(nèi)的復(fù)雜用途和交替溫度的場(chǎng)合。

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